一、异基因外周血干细胞的动员、检测及临床移植的应用研究（论文文献综述）
苏龙[1]（2021）在《阻断CXCR4对移植物抗白血病效应与移植物抗宿主病影响的研究》文中指出研究背景与目的急性白血病是严重威胁人类健康的恶性血液系统疾病之一,化疗仍是其主要的治疗手段,部分复发难治患者需要接受更强烈的治疗方案,如异基因造血干细胞移植（allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HCT）。然而,复发仍旧是急性白血病治疗失败的主要原因。治疗后骨髓残留白血病细胞是复发的根源所在。与髓外复发相比,骨髓复发患者治疗困难,长期预后差。因此,如何清除骨髓中的残留白血病细胞,对于提高急性白血病患者的治疗效果、改善整体预后,甚至实现治愈白血病的最终目标具有十分重要的意义。趋化因子及其受体在造血与免疫细胞发育、迁移及功能维持中均发挥十分重要的作用。趋化因子CXCL12及其受体CXCR4参与了造血细胞发育、造血干细胞（hematopoietic stem cells,HSC）向骨髓归巢及其在骨髓微环境中的定居。此外,CXCL12/CXCR4在急性白血病细胞向骨髓迁移及其在骨髓中的定居亦发挥关键性作用。骨髓微环境通过多种机制,如免疫细胞、细胞因子等,维持免疫抑制状态,保护HSC免受损伤从而维持正常造血及机体必要时的应急造血。骨髓微环境同样对白血病细胞具有保护作用,可使白血病细胞对化疗药物、分子靶向治疗药物耐药,同时可抵抗免疫治疗。阻断CXCR4可动员白血病细胞进入外周血,从而可增强化疗药物与分子靶向药物的杀伤效果。然而,阻断CXCR4联合化疗对临床患者治疗的效果改善有限,考虑与化疗不能有效杀伤耐药细胞或白血病干细胞有关。因此,寻找更有效的杀伤耐药细胞或白血病干细胞的联合治疗手段才有可能进一步提高疗效。我们的前期研究已发现,CXCR4拮抗剂可增强异基因淋巴细胞回输（allogeneic lymphocyte infusin,ALI）的移植物抗白血病（graftversus-leukemia,GVL）效应。然而,该研究采用的是人造白血病（人CD34+细胞转染MLL-AF9基因）,可能存在一定的细胞特异性。采用免疫缺陷小鼠构建疾病动物模型,小鼠无完整免疫系统,因此,无法评估在完整免疫系统存在情况下,阻断CXCR4是否能够增强GVL效应。此外,CXCR4阻断对allo-HCT后移植物抗宿主病（graft-versus-host disease,GVHD）与供体细胞植入是否有影响,仍有待研究以明确。本研究的目的旨在确定CXCR4阻断是否可增强ALI与allo-HCT后GVL效应、是否对GVHD及供体造血细胞植入有影响,从而为开展后续临床试验提供直接证据与参考依据。方法采用临床患者标本构建患者来源的异种移植（patient-derived xenotransplants,PDX）模型,待外周血可检测到白血病细胞后,给予ALI。免疫细胞活化后给予CXCR4拮抗剂AMD3100治疗,治疗后检测外周血和/或组织中的白血病细胞水平。采用多种小鼠allo-HCT模型,以小鼠原代T细胞急性淋巴细胞白血病（Tcell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL）与急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）细胞作为靶细胞,研究移植后给予AMD3100对GVL效应的影响。建立小鼠急性（BALB/c小鼠→C57BL/6小鼠）与慢性（BALB/c小鼠→CB6F1小鼠）GVHD模型,研究CXCR4阻断对GVHD病程的影响。采用小鼠allo-HCT模型研究CXCR4拮抗剂对供体造血细胞植入的影响。结果1.通过对临床患者B细胞ALL（B-cell ALL,B-ALL）骨髓标本进行检测发现,白血病细胞表面均高表达CXCR4。采用患者标本构建PDX模型发现,CXCR4拮抗剂AMD3100可动员骨髓中的白血病细胞进入外周血,峰值为给药后3小时。2.采用3例患者标本建立PDX模型,给予1次或2次ALI联合AMD3100治疗。结果发现,PDX小鼠骨髓中的B-ALL细胞对ALI抵抗,而AMD3100可明显促进ALI对患者B-ALL细胞的杀伤,且可有效清除骨髓中的残留白血病细胞。3.在PDX模型中,当外周血白血病负荷较高时,可先行化疗预处理,降低白血病负荷,然后再给予ALI联合CXCR4拮抗剂治疗,同样可有效清除白血病细胞,包括骨髓中的白血病细胞。4.小鼠T-ALL与AML细胞亦高表达CXCR4,AMD3100可明显动员上述白血病细胞进入外周血,动员的峰值时间为给药后3小时。采用小鼠allo-HCT模型证明,移植后给予AMD3100可明显增强GVL效应,尤其在低白血病细胞情况下,该治疗方案可取得非常高的无病缓解率,使约85%的受体小鼠长期存活。5.采用小鼠急性与慢性GVHD模型证明,移植后短时间给予AMD3100对小鼠体重变化、生存率、GVHD临床评分及靶器官病理表现均无明显影响。6.采用小鼠非清髓性allo-HCT模型证明,移植后给予AMD3100可促进供体造血干祖细胞在受体小鼠骨髓中的植入。结论临床患者与小鼠白血病细胞均高表达CXCR4,阻断CXCR4可显着动员白血病细胞进入外周血。CXCR4阻断可明显增强ALI与allo-HCT后GVL效应,并可有效清除骨髓中的残留白血病细胞,使受体小鼠获得高的无病缓解率。移植后短时间给予CXCR4拮抗剂对急性与慢性GVHD均无明显影响,且可促进供体来源造血干祖细胞的植入。
王璐[2]（2020）在《MAC-haplo-HDPSCT后CMV、EBV感染的相关研究》文中指出目的:探讨清髓性预处理单倍体相合高剂量外周血造血干细胞移植术（MAC-haplo-HDPSCT）后病毒感染发生的情况。方法:收集自2009年1月至2018年12月在新疆医科大学一附院血液病中心行异基因外周血造血干细胞移植（Allo-HSCT）的患者281例,分为单倍型组（161例）和全相合组（120例）,比较不同移植方案下病毒感染发生的特点,回顾分析清髓性预处理单倍体相合高剂量外周血造血干细胞移植术后相关病毒感染的发生率、感染部位、相关高危因素及预后的特点。结果:本研究中病毒感染的总发生率为20.3%,单倍型组中,发生的病毒感染为37例,发生率为23.0%,全相合组中,发生病毒感染16例,发生率为13.3%;其中巨细胞病毒（CMV）感染总发生率为7.8%,单倍型组CMV发生率10.56%,全相合组CMV发生率4.2%;EB病毒（EBV）总发生率为3.9%,单倍型组EBV发生率5.59%,全相合组EBV发生率1.7%。在单倍型组CMV感染的多因素分析中出血性膀胱炎（HC）OR为2.881,P=0.048。结论:与全相合移植相比,清髓性预处理单倍体相合高剂量外周血造血干细胞移植术后病毒发生率较高,其中巨细胞病毒感染发生率比EB病毒感染发生率高。研究中发现巨细胞病毒感染可能是出血性膀胱炎的危险因素。
王静[3]（2019）在《单倍体相合外周血造血干细胞移植治疗恶性血液病的预后研究》文中进行了进一步梳理引言异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）已经成为中高危恶性血液病初次诱导缓解后的首选治疗方案,单倍体相合造血干细胞移植（haplo-HSCT）因为供者来源广泛又易于获得,在临床应用越来越广泛。Haplo-HSCT国内常用的是非体外去除T淋巴细胞移植模式,采用“GIAC”体系,应用粒细胞集落刺激因子（G-CSF）动员的供者骨髓或外周血干细胞移植物联合抗胸腺细胞球蛋白（ATG）,诱导患者体内免疫耐受,降低了感染率及移植后移植物抗宿主病（GVHD）的发生率,造血及免疫重建时间缩短,无病生存率提高,复发率降低。本研究对在郑州大学第一附属医院造血干细胞移植中心接受外周血造血干细胞移植（PBSCT）的恶性血液病患者进行了回顾性总结,比较分析haplo-PBSCT与同胞全相合PBSCT移植后的疗效、细胞重建规律、GVHD及其他并发症的发生率,分析影响haplo-PBSCT预后的危险因素。资料和方法患者资料:2011年4月至2018年8月行外周血造血干细胞移植的176例恶性血液病患者,其中同胞全相合PBSCT 78例,haplo-PBSCT 98例。全相合移植组年龄高于单倍体移植组（p=0.001）,男性比例低（p=0.025）。两组疾病分布、移植前疾病缓解状态基本一致。全相合PBSCT采用改良BuCy方案,haplo-PBSCT采用改良BuCy+ATG方案,CsA+MMF+短程MTX三联预防移植物抗宿主病。结果176例患者中位随访时间为314（36-1810）天,haplo-PBSCT患者1年和3年累积总生存（OS）率低于全相合PBSCT患者,分别为[（49.2±5.7）%对（73.5±5.3）%,p<0.001;（39.1±6.1）%对（61.8±6.0）%,p=0.001]。haplo-PBSCT患者1年累积复发率高于全相合PBSCT患者[（35.7±6.2）%对（17.4±4.6）%,p=0.004],两组患者累积无病生存（DFS）率和累积非复发死亡（NRM）率差异均无统计学意义。造血重建情况:所有患者粒系均成功植活,两组患者在中性粒细胞植入、血小板植入及红系植入方面差异均无统计学意义。移植后（0-100）天haplo-PBSCT患者血小板输注量高于全相合PBSCT患者[10（2-57）U对6（1-27）U,p=0.000],两组患者红细胞输注方面差异无统计学意义。GVHD发生情况:haplo-PBSCT患者aGVHD累积发生率高于全相合PBSCT患者（53.1%对23.1%,p<0.001）,但两组间Ⅲ-Ⅳ度aGVHD的累积发生率差异并无统计学意义（9.8%比3.8%,p=0.181）。巨细胞病毒（CMV）感染情况:haplo-PBSCT患者CMV感染累积发生率高于全相合PBSCT患者[67.3%比31.3%,p=0.000],CMV感染发生时间早于全相合PBSCT患者,p=0.004。haplo-PBSCT预后危险因素分析:1、与标危组相比,高危组累积OS率、DFS率降低,复发率增高,p值分别为0.041、0.045和0.002;2、与无或轻度aGVHD的患者相比,发生Ⅲ-Ⅳ度aGVHD的患者累积OS率、DFS率降低,累积NRM率增高,p值分别为0.000、0.000和0.000;3、+60d血小板计数<50×109/L的患者与血小板计数≥50×109/L患者相比,累积OS率、DFS率降低、累积NRM率增高,p值分别为0.049、0.032和0.007;4、移植后前100天内红细胞输注量≥6U的患者与红细胞输注量<6U的患者相比,累积NRM率增高,p=0.040;5、EBV再激活患者与无EBV再激活患者相比累积OS率、DFS率降低、累积NRM率增高,p值分别为0.006、0.009和0.017。多因素分析显示疾病高危状态是影响OS、DFS和RR的独立危险因素,Ⅲ-Ⅳ度急性GVHD是影响NRM的独立危险因素。在生存超过60天的92例haplo-PBSCT患者中,+60天外周血中性粒细胞中位值为2.5（0.2-14.7）×109/L,血红蛋白中位值为98.5（49-143）g/L,血小板中位值为56.5（7-259）×109/L。血小板恢复不良（30≤PLT<80×109/L）的发生率明显高于中性粒细胞减少（ANC<1.5×109/L）和血红蛋白减少（Hb<80g/L）（48.9%对21.7%,p<0.001;48.9%对 22.8%,p<0.001）。+60天和+100天时血小板减少（PLT≤29×109/L）发生率分别为23.9%和17.3%。与血小板恢复不良组和血小板恢复组相比,+60天血小板减少组累积OS率和DFS率降低,累积NRM率增高,+100天血小板减少组累积OS率降低,累积NRM率增高,多因素分析Ⅲ-Ⅳ度aGVHD会增加+60天继发性血小板减少的发生风险,HR=4.53,95%CI:1.21-17.02,p=0.025。多因素分析显示+60天PLT≤29×109/L是NRM率增高的独立危险因素,p=0.012,疾病高危状态是RR增高的独立危险因素,p=0.012,+60天PLT≤29×109/L与疾病高危状态是OS率和DFS率下降的危险因素。结论1相比同胞全相合PBSCT,Haplo-PBSCT后累积OS率下降,1年累积复发率增高,但累积DFS率及NRM率差异无统计学意义,CMV感染率和aGVHD发病率增高,但Ⅲ-Ⅳ度aGVHD的累积发生率并未增高。2 Haplo-PBSCT后血小板减少及血小板恢复不良的发病率较高,+60天PLT≤29× 109/L是NRM率增高的独立危险因素,是OS率和DFS率下降的危险因素。Ⅲ-Ⅳ度aGVHD是继发性血小板减少的独立危险因素。3移植前疾病高危状态是RR增高的独立危险因素,是OS率和DFS率下降的危险因素。
郝莎,董芳,胡林萍,程涛[4]（2018）在《造血干细胞生物学及临床应用研究概况》文中提出造血干细胞（hematopoietic stem cell, HSC）是一类具有自我更新（self-renewal）和多向分化潜能（multi-lineage differentiation）的造血组织干细胞,通过定向分化产生各系造血祖细胞（如淋系祖细胞和髓系祖细胞等）,再大量增殖分化为各种成熟的功能性血细胞,从而维持整个机体的稳态造血。HSC是发现最早、研究历史最长、临床应用最为有效且广泛的一类重要的成体组织干细胞。造血干细胞移植（hematopoietic stem cell transplantation, HSCT）可以治愈某些血液系统及非血液系统疾病,至今已经历了60余年的发展,是最经典和成熟的干细胞临床应用方案。因此, HSC的研究和应用奠定了干细胞生物学和再生医学的发展。近些年,随着相关基础科学和新技术的发展,一方面为HSC成为基因工程和组织工程的种子细胞提供了更为丰富的理论依据和技术支持,进而进一步拓展其临床应用;另一方面,对HSC生理功能调控及机制的研究也将继续为其他干细胞研究领域提供一个良好的范式。该文就HSC的生物学特性、HSCT的发展、临床应用现状、存在问题及发展前景作一综述。
徐建丽[5]（2018）在《亲缘间HLA单倍体相合非体外去T细胞高剂量PBSCT治疗恶性血液肿瘤及移植后aGVHD与共刺激分子B7家族关系的研究》文中指出目的:探讨亲缘HLA单倍体相合非体外去T细胞高剂量外周血造血干细胞移植（RH-PBSCT）治疗恶性血液肿瘤临床疗效,并分析移植后免疫重建及其影响因素,同时分析急性移植物抗宿主病（aGVHD）的临床特征及影响因素,并初步探讨共刺激分子B7家族与其的关系,以期初步探讨a GVHD发生的机制,从而建立我们独特RH-PBSCT模式并不断进行优化。方法:选取2004年1月至2014年12月采用RH-PBSCT模式进行移植的154例患者（RH组）,分析植入、DFS、OS、GVHD、感染、NRM及复发,并与同期行同胞HLA全相合非体外去T细胞外周血造血干细胞移植（MS-PBSCT）的115例患者（MS组）进行了比较。对其中118例患者（RH组78例,MS组40例）使用流式细胞技术检测淋巴细胞亚群及Treg细胞数目;使用流式细胞CBA及ELISA技术检测患者血清中Th1/Th2/Th17细胞因子及TGF-β、B7家族,分析移植后两组免疫重建规律及B7家族变化,a GVHD对RH组免疫重建及B7家族变化的影响。结果:1.（1）RH组有1例患者未植入,MS组全部植入成功。3年的DFS和OS率两组比较无统计学差异（P=0.109,P=0.159）。（2）RH组a GVHD的累计发生率明显高于MS组[（61.1±3.9）%比（33.9±4.4）%,P<0.05],但Ⅱ～Ⅳ度和Ⅲ～Ⅳ度a GVHD的累计发生率两组间无差异[（36.7±4.5）%比（25.1±4.2）%,P=0.494;（11.8±3.1）%比（8.0±2.7）%,P=0.368];RH组与MS组c GVHD及局限性c GVHD的累积发生率无差异[（59.2±4.4）%比（69.4±4.8）%,P=0.731;（51.7±4.6）%比（49.0±5.8）%,P=0.151],RH组广泛性c GVHD的发生率则明显低于MS组[（14.3±4.2）%比（42.1±6.3）%,P=0.01];RH组皮肤型a GVHD的累计发生率明显高于MS组,而肝脏和消化道发生a GVHD的累计发生率两组间无差异;RH组以皮肤c GVHD为主,MS组以肝脏cGVHD为主;单因素分析显示a GVHD的发生与HLA配型、相合位点数有显着相关;多因素分析显示仅HLA配型是发生a GVHD的危险因素;多因素分析显示HLA配型、疾病状态、a GVHD的发生是发生c GVHD的危险因素;（3）感染、NRM及复发、间质性肺炎累计发生率在RH组及MS组无明显差异[（64.6±3.7）%比（40.3±4.2）%,P>0.05,P=0.120,P=0.820,P=0.832];出血性膀胱炎、带状疱疹的累计发生率RH组高于MS组[（36.1±3.8）%比（17.7±3.3）%,P<0.05;（15.9±2.9）%比（8.5±2.4）%,P=0.049]。移植前后巨细胞病毒抗体及DNA阳性率、EB病毒DNA两组无明显差异（P=0.928,P=0.883,P=0.653）。2.1移植后RH组与MS组相比,CD3+T、CD8+T、B细胞、NK细胞在移植后恢复两组之间无差异,移植后CD4+T、CD4/CD8比例在RH组恢复慢,与MS组比较差异有统计学意义。IL-2、IFN-γ水平在移植后均有升高,RH组升高水平及持续时间较MS组高,两组比较差异具有统计学意义。IL-4及IL-10水平在移植后均有降低,IL-4在RH组移植前后均检测不出,而MS组持续低水平,两者有统计学意义;RH组及MS组IL-10水平两组比较差别无统计学意义。移植后RH组外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg、IL-17及TGF-β水平下降明显,而MS组无明显变化,两组比较差异具有统计学意义（P<0.05）。2发生a GVHD后RH组CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD4/CD8比值、总B细胞、NK细胞与未发生a GVHD组变化无明显差异,IL-4、IL-17、TGF-β血清水平高于未发a GVHD患者（P=0.02,P=0.006,P=0.031）。患者在发生a GVHD后Treg细胞数量显着低于未发生a GVHD患者（P=0.006）。IL-10水平在未发生a GVHD患者血清逐渐增加,但在发生III-IV度a GVHD患者明显降低（P<0.05）。3.1移植后B7-1水平在移植后逐渐升高后再下降,MS组B7-1总体水平高于RH组,差异有统计学意义（P=0.049）,在a GVHD发生后,MS组3月、6月、9月时B7-1水平低于未发生GVHD组,差异有统计学意义（P<0.001）。PD-1水平在移植后MS及RH组中均升高,两组之间无差异;RH组未发生GVHD患者PD-1水平较发生GVHD者明显升高,两者差异有意义（P=0.039）。PD-L1水平在移植后降低,RH组恢复快于MS组,但两组之间比较无差异;MS组发生a GVHD患者组PD-L1水平高于未发生a GVHD组,两者差异有意义（P=0.02）。2RH组发生a GVHD后患者PD-1水平低于未发生a GVHD患者,而TGF-β水平升高,相关性分析中两者呈负相关,B7-1水平发生a GVHD者也低于未发生a GVHD患者。结论:我们独特的RH-PBSCT模式治疗恶性血液肿瘤取得了较好的临床疗效,虽然总的a GVHD发生率明显高于MS-PBSCT,但重度a GVHD发生率并不高,主要的发生部位为皮肤;RH-PBSCT后1年内CD4+T细胞及其各个亚群均存在免疫重建延迟,RH组血清IL-4、IL-17、TGF-β水平的升高和Treg及IL-10水平降低对a GVHD早期临床诊断的确立能提供帮助。RH-PBSCT后未发生a GVHD时B7-1水平显着低于MS-PBSCT,而RH-PBSCT后发生a GVHD时B7-1水平与未发生a GVHD患者比较无差异,表明我们独特的RH-PBSCT模式可能通过B7家族中B7-1参与a GVHD的调控,从而降低重度a GVHD发生率。
黄晴[6]（2017）在《环磷酰胺在移植治疗再生障碍性贫血中的应用及对造血功能的影响》文中进行了进一步梳理研究背景及目的背景再生障碍性贫血（aplastic anemia,AA）是一组由理化因素、生物因素及不明原因引起的骨髓造血衰竭性疾病,具有致死率高、预后差等特点,造血干细胞移植成为根治AA的最有效方法。然而由于计划生育政策,同胞兄妹供者较少,对于单倍型造血干细胞移植来说,患者父母及兄弟姐妹均可作为其供者来源,使得单倍型造血干细胞移植成为主流力量。但严重的移植物抗宿主病（graft versus host disease,GVHD）和移植物排斥反应的发生成为主要障碍,直接影响移植后的长期生存率。环磷酰胺（CTX）具有强效的免疫抑制抗肿瘤作用,移植后高剂量CTX诱导免疫耐受在单倍型移植中的应用引起关注,但是应用时机和剂量很重要。CTX诱导耐受新方法在单倍型移植中占有重要作用,但对于CTX诱导免疫耐受的作用机制及特点目前尚未完全清楚,特别担心对造血重建的影响,本研究通过小鼠实体实验观察CTX对造血干细胞的影响,为移植工作提供理论依据。目的1.评价单倍型移植后应用高剂量CTX诱导免疫耐受治疗重型再生障碍性贫血（SAA）的临床疗效;2.通过动物实验观察不同剂量CTX对小鼠造血功能的影响。研究方法1.2014年1月至2015年8月期间单中心中国人民解放军陆军总医院血液科移植后使用高剂量CTX诱导免疫耐受单倍型造血干细胞移植新方法治疗的16例SAA患者,男7例,女9例,患者中位年龄14.5（430）岁。所有均为亲缘单倍型供者,其中父亲供者9例,母亲供者5例,同胞兄妹供者2例,供者中位年龄31（2045）岁。观察全部患者移植后植入情况、造血重建（包括中性粒细胞及血小板植活时间）、移植相关并发症（移植物抗宿主病、感染及出血）、存活情况及随访时间等指标。2.选取雌性纯系BALB/c小鼠,按照常规方法制成再生障碍性贫血小鼠模型,所有造模成功后的小鼠随机分组以供实验需要。将环磷酰胺药物以无菌生理盐水溶解,按CTX处理剂量（380mg/kg、200mg/kg、100mg/kg）作用于实验组小鼠,动态观察实验组（HD-CTX组、MD-CTX组、LD-CTX组）、AA模型对照组、正常对照组小鼠一般状况、外周血血常规变化、双侧股骨有核细胞数（NC）及股骨骨髓病理切片、半固体甲基纤维素培养法测定红系集落形成单位（BFU-E）、粒单系集落形成单位（CFU-GM）及流式细胞术检测外周血及骨髓CD34+细胞变化。结果1.全部16例患者除1例原发排斥,余15例完全植入,其中有2例患者第1次未植入,行二次移植达到完全供者植入状态。粒细胞植活中位时间15.5（1426）天、血小板植活中位时间22.0（1732）天。随访至2016年8月,中位随访时间17.4（928）月,存活患者随访时间均在6个月以上,最长随访时间达28个月。移植后共有8例发生急性GVHD,其中IV度急性GVHD 2例,III度急性GVHD 3例,III度急性GVHD 3例,按部位分为肠道3例、肝脏3例、皮肤2例;2例发生慢性GVHD,均发生在皮肤。肺部感染7例;巨细胞病毒感染3例,其中2例发展为巨细胞肺炎,予更昔洛韦、磷甲酸钠治疗后好转,无肝静脉综合征及移植后淋巴细胞增殖发生;出血性膀胱炎4例。所有患者1例因未植入死亡,1例因严重肺部感染死亡,1例因急性GVHD死亡,其余13例仍存活。2.1)全部受鼠基于AA再障发病机制建造AA小鼠模型成功。2)正常对照组白细胞及血小板数目波动在正常范围;AA模型组白细胞及血小板变化大致相似,均进行性下降,第5天开始明显下降,分别为（0.46±0.32）×109/L、（33.4±14.67）×109/L,差异均有统计学意义（P<0.05）;LD-CTX及MD-CTX组白细胞数目在第9天开始回升。HD-CTX组白细胞数目变化与模型组大致相同。AA模型组骨髓及外周血CD34+细胞进行性下降,第5天降至较低水平,（1.76±0.28）×109/L,第7天开始回升,但仍低于正常,为（2.86±0.45）×109/L,差异有统计学意义（P<0.05）。LD-CTX及MD-CTX组第3天骨髓及外周血CD34+细胞降至最低,分别（0.66±0.30）×109/L、（0.72±0.40）×109/L,差异有统计学意义（P<0.01）,第7天细胞数开始回升。HD-CTX组骨髓及外周血CD34+细胞第3天最低,为（0.49±0.38）×109/L,随后一直处于低水平,差异有统计学意义（P<0.05）。模型AA组CFU-GM、CFU-E集落形成数明显减少,48h、96h分别形成的CFU-GM、CFU-E集落数为（10.00±5.00）个、（5.00±3.00）个、（12.67±3.79）个、（5.33±3.21）个,差异均有统计学意义（P<0.05）。LD-CTX、MD-CTX、HD-CTX组与模型组比较无明显差异。结论1.移植后高剂量CTX诱导免疫耐受单倍型异基因造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血,造血重建稳定,有较好的临床疗效。2.单倍型造血干细胞移植后应用高剂量CTX诱导免疫耐受可减少移植相关并发症,是预防单倍型移植GVHD发生的新方法。3.将受鼠BALB/C小鼠经Co60γ放射线亚致死量（5.5Gy）全身照射,将DBA/2小鼠的淋巴细胞悬液在4小时内经尾静脉输注受鼠（BALB/C鼠）体内,该过程大致模拟AA发病过程,制造AA小鼠模型,观察AA小鼠外周血血常规变化、骨髓有核细胞数及骨髓病理变化均符合AA的病理变化,说明小鼠AA造模成功。4.动物实验证实CTX对骨髓造血功能无明显损伤作用,为临床移植工作应用高剂量CTX诱导免疫耐受提供理论依据。
唐暐[7]（2015）在《白消安为主的预处理方案治疗急性白血病》文中研究指明背景与目的白消安静脉制剂取代传统口服白消安作为预处理方案药物之一,应用于外周血造血干细胞移植可有效降低药物毒性从而降低移植的治疗死亡率已在临床上得到广泛的认可。但是,目前还没有就白消安应用于急性淋巴细胞白血病异基因外周血干细胞方面的相关报道,为此,我们临床就白消安环磷酰胺作为传统的预处理方案应用于急性淋巴细胞白血病异基因外周血干细胞移植所产生的药物毒性及移植的治疗相关死亡率进行的一定的研究。材料与方法我们回顾性分析了从2007年1月至2010年10月中的42例找到HLA相合供者并应用白消安环磷酰胺作为预处理方案的异基因外周血干细胞移植患者,其中同胞供者的移植患者为18例,非相关供者移植的患者为24例。42例接受移植的患者中有33例为第一次完全缓解状态下接受移植,2例为第二次完全缓解状态下接受移植,7例为二次缓解以上的状态接受外周血造血干细胞移植。患者的中位年龄为28岁（范围1755岁）。结果42例白消安环磷酰胺预处理异基因外周血干细胞移植患者中位随访15个月（范围148个月）,13例患者死亡,30个月总体生存率:第一次完全缓解后移植的总生存率为56.5%±10.6%（65.7%±12.5%）;第二次完全缓解后再接受移植的总生存率为25.4%±15.5%（P<0.001）。42例患者中有11例患者于移植后226个月复发,统计显示第一次完全缓解后接受移植后30个月复发率为40%±10.9%（32.0%±12.7%）,而第二次及之后缓解的患者接受移植后随访30个月复发率为71.4%±17.1（P=0.001）。II-IV度急性移植物抗宿主病（acute graft-versusdisease,GVHD）的发生率为39.2%±8.8%,III-IV度急性移植物抗宿主病发生率为7.4%±4.1%。慢性移植物抗宿主病发生率为63.9%±11.7%,广泛慢性移植物抗宿主病发生率为19.3%±7.9%。42例移植患者中2例临床诊断为静脉阻塞综合症（venoocclusive disease,VOD）,肝静脉栓塞综合征的发生率为4.7%,仅1例因严重肝静脉栓塞综合征而死亡。其它白消安环磷酰胺预处理移植相关的毒性还包括1例患者出现弥漫性肺泡出血和例患者出现出血性膀胱炎。4例患者因治疗相关毒性而死亡,随访30个月白消安环磷酰胺预处理移植治疗相关死亡率为9.7%±4.6%。总结白消安环磷酰胺预处理方案可安全应用于成人急性淋巴细胞白血病患者外周血造血干细胞移植,其具有低静脉阻塞综合症发生率及低治疗相关死亡率优势。背景与目的探索有效治疗难治复发急性髓细胞白血病的异基因外周血干细胞移植预处理方案,本项单臂II期临床研究采用福达拉滨、阿糖胞苷及去甲氧柔红霉素方案化疗以有效降低肿瘤负荷,并于化疗结束7天后予以清髓预处理后行异基因外周血干细胞移植。材料及方法复发难治急性髓细胞白血病患者予以福达拉滨、阿糖胞苷及去甲氧柔红霉素化疗以最大程度降低患者体内的肿瘤负荷,于化疗结束7天,即于患者骨髓抑制期予以福达拉滨、白消安清髓预处理并输注经集落刺激因子动员的人类白细胞抗原（HLA,human leucocyte antigen）相合的同胞或非相关供者的外周血干细胞行外周血干细胞移植。移植后对患者的2年无白血病生存率、完全缓解率、移植后2年的总生存率、非复发死亡率及复发率等进行随访。结果16例难治复发急性髓细胞白血病患者,平均年龄为36岁（1660岁）,9例初次诱导化疗未有缓解、2例缓解后早期复发、5例处于复发或难治期急性髓细胞白血病患者加入临床研究。这些患者平均前期接受化疗的次数为4次（310次）,加入临床研究前16例患者骨髓白血病细胞平均为55%（190%）,16例患者中6例患者行HLA相合同胞供者外周血干细胞移植,10例接受HLA相合的非相关供者异基因外周血干细胞移植。移植后随访28天时,15例患者骨髓缓解（11例患者达到完全缓解,4例患者骨髓缓解但血小板未有完全恢复）。进一步随访,8例患者移植后持续完全缓解存活,中位无白血病生存率为29.5月（9.540.5月）,4例患者移植后复发（其中3例复发死亡）,另4例患者因移植相关毒性死亡。2年非复发相关死亡率及复发率分别为25.0±10.8%及33.4±13.8%,2年总生存率为53.5±13.1%,2年无白血病生存率为50.0±12.5%。按照Simon II临床研究设计,随访异基因外周血干细胞移植后2年,14例患者中5例及以上患者始终骨髓保持缓解则提示此临床研究有进一步发展价值。结论基于以上的II期临床研究结果可见应用福达拉滨、阿糖胞苷及去甲氧柔红霉素化疗降低白血病肿瘤细胞负荷后行以福达拉滨及白消安为主的预处理方案行外周血干细胞移植有效治疗复发难治急性髓细胞白血病,并有意义行大样本的III临床研究（临床研究专利:NCT01496547）。
盛立霞[8]（2014）在《NK细胞调节移植物抗宿主病中同种反应性T细胞应答的作用及机制研究》文中认为在本研究中我们首先分析临床造血干细胞移植后NK细胞及其受体的重建与aGVHD的关系；接着,我们通过动物模型和体外细胞研究探讨供者来源的NK细胞负向调节aGVHD中的同种反应性T细胞应答的作用及相关机制；最后我们探讨达沙替尼和AMD3100两个药物对NK细胞的体外扩增、移植物动员和生物学功能的调节作用。我们的研究有助于深入阐明NK细胞调节aGVHD中T细胞应答的机制,完善aGVHD的发生机制,建立aGVHD预警的生物学标志；同时对寻找aGVHD有效预防和治疗的新策略具有重大的理论和实际意义。具体研究分为3部分：1) Allo-HSCT后NK细胞及其受体的重建与aGVHD的关系；2)NK细胞抑制aGVHD中同种反应性T细胞应答的作用和机制；3)酪氨酸激酶抑制剂和干细胞动员剂对NK细胞的aGVHD调节作用的影响。第一章Allo-HSCT后NK细胞及其受体的重建与aGVHD的关系目的：通过检测移植后Allo-HSCT后早期NK细胞及其受体的动态重建规律,分析与aGVHD的关系,为探讨NK细胞在Allo-HSCT中对aGVHD的调节作用提供线索,并为移植后进一步明确患者aGVHD危险分层和早期预警寻找合适的指标。方法：研究对象为2012年4月至2013年12月在浙江大学医学院附属第一医院骨髓移植中心接受异基因造血干细胞移植的患者,共63名患者及相应的健康供者进入临床研究,在造血干细胞移植后3月内每1-2周采血一次,使用流式细胞术检查移植物和移植后外周血中T和NK细胞的比例、NK细胞亚群分布、NK细胞表面NKG2D/DNAM-1/NKP46/NKG2A等受体表达以及T细胞表面CD25/CD69/MICA/MICB/PVR/Nectin2等表达,并结合临床GVHD资料进行统计分析。结果：2012年5月-2013年12月,在浙江大学医学院附属第一医院骨髓移植中心,共有63例患者纳入研究,其中ALL27例,AML26例,NHL2例,MDS7例,CML1例。中位年龄30岁（12岁-50岁）,男性34例,女性29例。接受亲缘全相合移植22例,无关供者移植14例,半相合移植27例。共36例患者发生aGVHD（57.14%）,27例无aGVHD发生（42.86%）,分别纳入aGVHD组和无aGVHD组。在发生aGVHD组的患者,输注的移植物中NK细胞的百分比为（8.95±6.38）%、NK细胞绝对计数（19.87±14.72）*106/Kg、NK与T细胞的数量比值为0.14±0.09。而在未发生aGVHD组的患者,输注的移植物中NK细胞的百分比为（10.64+5.73）%、NK细胞绝对计数（20.66±10.57）*106/Kg、NK与T细胞的数量比值为0.20±0.11。aGVHD组与无aGVHD组间比较,NK细胞百分比例和绝对计数差别无统计意义,而NK：T比值在无aGVHD组高于aGVHD组,P<0.05。在移植后较长一段时间内,重建的NK细胞亚群分布与健康供者存在差异,在重建早期,CD56brigt、 NKG2A+和CD11b+CD27+这些相对不成熟的亚群的比例显着高于健康对照,随着时间推移,逐步发育成熟。移植后最早重建的NK细胞的NKG2A阳性率在aGVHD组为76.00±9.20%,高于无aGVHD组（59.59±6.10%）。移植后早期重建的NK细胞表达活化型受体NKP46与健康供者无显着差异,而NKG2D和CD226的水平较健康供者降低,其中NKG2D及CD226的水平在aGVHD组低于无aGVHD组。CD226的配体PVR在aGVHD组T细胞表面的表达水平为2470.39±1461.73,高于无aGVHD组（1440.81±648.44,P<0.05）和健康供者（1148.91±281.64,P<0.05）。T细胞表面表达Nectin2的水平在移植后aGVHD组与无aGVHD组无显着差异。NKG2D的配体MICA/B在移植后aGVHD组T细胞表面表达水平为3827.00±1849.34,高于无aGVHD组（1760.18±1010.87,P<0.05）和健康供者（1570.82±1235.15,P<0.05）。在aGVHD患者,NK细胞对活化T细胞的脱颗粒和细胞毒作用显着低于健康供者,采用IL-15激活能够部分逆转aGVHD患者NK细胞的表型和功能缺陷。结论：NK细胞是造血干细胞移植后最早重建的淋巴细胞亚群,其数量和功能的重建影响aGVHD的进程。在我们的研究中发现,移植物中NK：T细胞的比例与aGVHD的发生率相关。移植后重建的NK细胞表面DNAM-1/NKG2D活化型受体表达水平下降,而NKG2A水平增高,导致其杀伤活化T细胞和负向调节aGVHD的功能受损。NK细胞重建早期的DNAM-1/NKG2D表达水平与aGVHD的发生有关。Allo-HSCT后供者NK细胞亚群和受体的早期重建可能参与aGVHD的调节过程。第二章NK细胞抑制aGVHD中同种反应性T细胞应答的作用和机制目的：本部分的目的是探讨供者来源的NK细胞在动物模型中对aGVHD中的同种反应性T细胞应答的调节作用,并通过体外实验进一步阐明相应的分子机制。方法：建立小鼠MHC单倍体相合的aGVHD模型,在该模型基础上比较不同NK：T细胞输注比例对小鼠aGVHD的调控作用,对供者T细胞增殖、凋亡以及T细胞亚群的影响；采用流式细胞仪分选供者PBMCs中的CD3+T细胞和CD56+NK细胞,采用PHA、Allo-DC、anti-CD3/CD28单抗刺激CFSE标记的供者T淋巴细胞增殖,比较加入不同比例的供者NK细胞抑制各种刺激引起的T淋巴细胞增殖的能力,采用CFSE-7AAD双标杀伤实验和基于CD107a释放的脱颗粒实验检测供者NK细胞对活化的供者T细胞的细胞毒功能,采用抗体阻断试验检测NK细胞杀伤活化T细胞过程中NKG2D、LFA-1、DNAM-1、FAS、NKG2A、TIM-3等受体的功能,采用Western blot检测与活化的T细胞相互作用后NK细胞内部ERK信号的磷酸化水平。结果：1)在MHC单倍体相合的小鼠GVHD模型中,NK细胞能够抑制T细胞增殖、促进活化T细胞凋亡,具有GVHD保护作用；2)在淋巴细胞增殖实验中发现供者NK细胞能够抑制PHA、anti-CD3/CD28单抗以及异基因DC刺激引[起的供者T细胞增殖,并且随着NK：T细胞比例的增加,抑制作用也增强；3)在细胞毒实验中供者NK细胞能够选择性杀伤激活的供者T细胞,而对静息状态下的T细胞没有杀伤作用,脱颗粒实验也进一步证实NK细胞仅与激活T细胞共孵育才具有脱颗粒反应,不同亚群的NK细胞对活化T细胞的脱颗粒反应也不同,其中NKG2A+>NKG2A-, CD56dim>CD56bright;4)与静息状态相比,激活的T细胞表达更高水平的MICA/B、ULBP-1/4、PVR、ICAM-1等激活型NK受体的配体；5)抗体阻断实验结果提示NKG2D、DNAM-1、LFA-1促进NK细胞对活化T细胞的细胞毒作用,NKG2A、TIM-3抑制NK细胞对活化T细胞的细胞毒作用,FAS/FASL通路不参与这一过程；6)NK细胞与活化的自身T细胞接触后10-30min, ERK蛋白即出现快速的磷酸化。结论：我们首先通过小鼠模型证实供者NK细胞能够抑制T细胞增殖、促进活化T细胞凋亡,具有GVHD保护作用。接着,我们首次在人体体外试验中证实同种抗原活化的供者T细胞通过上调NK细胞活化型受体的配体,激发供者NK细胞对自身活化T细胞的细胞毒作用,ERK信号参与NK细胞对活化T细胞的细胞毒作用。NK细胞通过LFA-1/NKG2D/CD226激活受体信号触发的细胞毒作用来负向调节同种抗原刺激的T细胞增殖的能力。第三章干细胞动员剂和酪氨酸激酶抑制剂对NK细胞的aGVHD调节作用的影响目的：最近研究表明某些移植合并用药可能会发挥免疫调节功能,本部分的目的是探讨移植中应用的干细胞动员剂AMD3100和靶向药物TKIs对NK细胞的移植物动员效应、生物学功能以及体外扩增的调节作用,旨在探寻能够充分激发Allo-HSCT中NK的GVL效应并增强NK细胞的GVHD调节功能的最佳方案。方法：采用CB6F1小鼠作为受试对象,按干细胞动员方案分4组：（1）PBS对照组；（2）AMD3100组：5mg/Kg,单剂量腹腔注射；（3）G-CSF组：250mg/kg/d*5d,腹腔注射；（4）G-CSF+AMD3100组：剂量同上。给药后Oh、1h、2h、4h尾静脉采血,通过细胞计数结合流式细胞仪检测NK细胞的动员效率；在给药后立即通过尾静脉按细胞数1：1输注0.5uM和10uMCFSE标记的亲代小鼠C57BL/6（CFSElow）和CB6F1（CFSEhigh）的脾细胞,第4天应用FCM检测CFSElow和CFSEhigh细胞比例并计算NK细胞的体内杀伤率；在给药后4h获取小鼠的脾细胞,通过流式分选NK1.1+NK细胞,体外检测NK细胞对YAC-1细胞株的脱颗粒作用以及杀伤活性。从健康成年人外周血中分离单个核细胞（PBMCs）,采用添加IL-2.IL-15的10%人AB血清的SCGM培养液进行NK细胞的扩增培养,在此培养体系中添加不同浓度的伊马替尼、尼洛替尼或者达沙替尼,采用细胞计数和FCM检测细胞表型比较三种TKIs对NK细胞体外扩增效率的影响；采用CFSE标记增殖试验检测达沙替尼对NK细胞抑制同种抗原刺激的T细胞增殖的影响；接着采用脱颗粒试验结合CFSE/7AAD细胞毒实验比较三种TKIs对NK细胞杀伤白血病细胞和激活T细胞功能的影响。结果：5mg/kg的AMD3100单次注射能够有效的动员NK细胞,Oh、1h、2h、4h外周血NK细胞绝对数分别是（4.89±0.83）*105/ml,（22.85±3.91）*105/ml,（34.77±2.82）*105/ml,（23.19±1.82）*105/ml;2h的NK数达到峰值,4h之后回落。单独采用G-CSF注射组则无NK细胞动员作用,AMD3100+G-CSF组与AMD3100组具有类似的NK细胞动员规律,在各时间点两组间的NK细胞绝对数无显着差异。在NK细胞体内杀伤实验中,G-CSF组对亲代细胞的排斥率为62.14+2.34%,低于PBS对照组69.09±2.64%; AMD3100组对亲代细胞的排斥率为80.67±4.87%,高于PBS对照组（P<0.05）, AMD3100+G-CSF组与AMD3100组间无显着差异（P>0.05）。在体外研究中,AMD3100组NK细胞的脱颗粒反应以及杀伤效率与PBS对照组间无显着差异,而G-CSF组以及G-CSF+AMD3100组NK细胞的体外细胞毒功能低于对照组。三种TKIs中,只有达沙替尼能够在体外增加NK细胞的体外扩增效率,而伊马替尼和尼洛替尼不能促进NK细胞的扩增。随着培养体系中达沙替尼浓度的增加,NK细胞的纯度逐步升高,但是高浓度的达沙替尼还会引起NK细胞的凋亡,NK细胞的绝对数在20nM达到峰值。采用20nM的达沙替尼作用后的NK细胞能够更加有效地抑制同种抗原刺激后的自体T细胞增殖,并且达沙替尼能够增加NK细胞对活化T细胞以及白血病细胞的细胞毒作用。达沙替尼体外扩增的NK细胞中细胞毒功能较弱的NKG2A+CD57-亚群比例下降,而细胞毒功能较强的NKG2A-CD57+亚群比例增高。达沙替尼能够促进NK细胞表面的CD226、NKP46及NKG2D等活化型受体表达的上调。结论：AMD3100用于造血干细胞移植的动员可以提高移植物中NK细胞的数量,增加移植物中NK：T比例,并且不影响NK细胞的细胞毒功能。适当浓度的达沙替尼可以增强NK细胞体外扩增的效率,并能够上调扩增的NK细胞表面活化型受体的表达和优先扩增胞毒功能较强的NKG2A-CD57+亚群,从而增强NK细胞对活化T细胞和AML细胞的细胞毒作用。我们的研究为目前Allo-HSCT中通过联合用药来降低GVHD的发生和保留GVL效应提供新的策略,并为下一步探索新的治疗靶点,开发新的药物打下研究基础。该部分研究内容已经发表于Transfusion杂志。
郭文治[9]（2014）在《Oridonin抑制移植排斥的机制研究》文中认为器官移植是治疗终末期器官疾病的最有效的治疗措施。器官移植可以明显改善患者生活质量,提高生存率,但是移植术后的排斥反应仍是阻碍移植物及移植患者长期生存的主要原因。目前预防和治疗排斥反应的主要手段仍是应用免疫抑制剂,不可否认,强有力的免疫抑制剂是移植成功的基石,目前免疫抑制剂虽能有效的抑制急性排斥反应,但是仍不能从根本上解决移植物的慢性排斥问题,目前临床上应用的免疫抑制剂均没有特异性,在确保移植物成活的同时,也广泛的抑制了机体的免疫力。长期应用免疫抑制剂,增加移植患者感染的风险及恶性肿瘤的发病率,有时这些并发症甚至是致命的。诱导机体对移植物抗原产生特异性免疫耐受,是解决同种异体器官移植排斥反应的最佳方式,既能消除排斥反应,又能摆脱移植患者对免疫抑制药物的终生依赖,有望提高移植患者的生存质量,提高移植物的长期存活率。但是在临床上发生免疫耐受是罕见的,很大程度上可以说是一个偶然的结果。免疫耐受的确切机制目前仍不清楚,摆在移植界及免疫学界的共同难题就是如何才能够成功诱导受者的移植免疫耐受。研究表明免疫耐受可能与T细胞的凋亡、耗竭及调节性T细胞等有关。细胞凋亡是对生命至关重要的一种生理或病理的普遍现象,是细胞按自身程序结束其生命的主动死亡,它不仅在衰老、退化和癌症中起着重要作用,也在移植病理过程中起着重要作用。近些年来,细胞凋亡对免疫系统的调节作用受到重视。越来越多的证据表明,T细胞的凋亡在免疫耐受的诱导及免疫耐受的维护上也发挥着关键作用。研究表明,通过细胞凋亡克隆清除活化的T细胞是移植免疫耐受的一个重要方面。同样,细胞凋亡在自身免疫性疾病中扮演着重要角色,通过观察Fas配体突变和清除缺陷的自身反应性T细胞和B细胞可来识别自身免疫性淋巴组织综合症患者。许多针对凋亡效应T细胞的治疗方法已被证明可以有效的治疗移植和自体免疫疾病。T细胞的耗竭在维护免疫耐受中发挥着关键作用,在治疗自身免疫性疾病及移植排斥中,应用许多不同方法致使效应性T细胞耗竭或凋亡都是有效的。如抗淋巴细胞或抗胸腺细胞球蛋白（ATG）已经被临床使用几十年了,ATG被用来处理各种临床上的情况,例如用于器官移植急性排斥的预防或救护,对异体的干细胞移植和GVHD的条件性处理,严重的再生障碍性贫血和各种自身免疫性疾病的处理。ATG的免疫抑制活性通过补体依赖的溶胞作用或者激活相关的凋亡,导致来自循环池中的外周T淋巴细胞的耗竭。正常免疫系统产生一些T细胞,其主要功能是免疫抑制,命名为调节性T细胞。调节性T细胞在自身免疫和炎症疾病的预防中,在调节病毒性和寄生虫性的感染免疫中,在母源对胎儿耐受维持中以及抗肿瘤免疫抑制中均起着关键的作用。调节性T细胞功能破坏是人类和动物自身免疫疾病和感染性疾病的主要原因。现在发现,任何获得性免疫反应,包括效应T细胞和B细胞的招募和活化,都有调节性T细胞的参与,而且调节性T细胞与效应性T细胞、B细胞的平衡对于免疫反应的强度及免疫耐受的建立都有重要作用。研究发现,调节性T淋巴细胞在免疫耐受的诱导和维持过程中发挥了重要的作用。有文献报道小鼠接受一定剂量放射处理后,调节性T细胞在体外被同种抗原刺激以后将诱导对骨髓和皮肤以及心脏同种移植物的长期的免疫耐受。对调节性T细胞进行足够的预刺激可被用来保护皮肤和心脏移植物免于急性和慢性排斥反应。欧洲的一项关于临床的研究结果发现,相对于发生排斥反应的7例器官移植患者,免疫耐受的5例器官移植患者外周血中CD4+CD25+T淋巴细胞明显升高,Foxp3mRNA表达升高3.5倍,提示外周血调节性T细胞可作为潜在的免疫耐受标志物。随着调节性T细胞特别是CD4+CD25+调节性T细胞（CD4+Treg）的发现,免疫调节机制在移植耐受中的作用越来越受到重视。Oridonin,是从冬凌草中分离出的一种四环二萜类化合物,由于具有独特生物学特性,已经被广泛地用来治疗感染性疾病。研究表明Oridonin具有抗炎、抗病毒等作用,特别在治疗上呼吸道感染方面。近来有资料显示Oridonin在白血病以及其他肿瘤治疗中具有显着的抑制细胞生长、促进凋亡的作用。Oridonin在食管癌、白血病和黑色素瘤中已经被用作辅助化疗药物。鉴于抗移植免疫排斥药物对机体免疫系统没有特异性,长期服用免疫抑制剂增加感染的几率,并且使感染往往更难以控制,恶性肿瘤的发生率也相应的增加。Oridonin会对机体免疫系统有那些影响?能否将Oridonin用于移植?还没有此类文献的报道。本课题通过体外实验研究Oridonin对细胞的抑制及凋亡,体内实验研究oridonin对外周及中枢T细胞的凋亡与竭,对调节性T细胞的影响,并成功建立同种异基因小鼠皮肤移植模型,通过观察Oridonin对小鼠皮肤移植排斥时间的影响、移植皮肤组织切片淋巴细胞浸润情况等,探讨Oridonin对于免疫系统的作用及机制,为器官移植后形成免疫耐受提供一种新的药物手段。目的观察oridonin对于免疫系统的作用及机制,为器官移植后形成免疫耐受提供一种新的药物手段。方法1.体外实验1.1体外不同浓度oridonin培养BALB/c小鼠脾脏淋巴细胞CFSE标记后,流式细胞仪检测细胞生长抑制情况。1.2.体外不同浓度oridonin培养BALB/c小鼠脾脏淋巴细胞,PI和Annexin-V染色后流式细胞仪检测脾脏淋巴细胞凋亡情况,脾脏中T细胞凋亡情况。2.将BALB/c小鼠随机分为两组,oridonin组和对照组,分别给予腹腔注射oridonin和佐剂。2.1.不同时间点检测两组小鼠外周血单个核细胞总数、流式细胞仪检测外周血中T淋巴细胞总数、T淋巴细胞及单核细胞比例、CD4+T细胞、CD8+T细胞比例变化。2.2.不同时间点检测两组小鼠脾脏单个核细胞总数、流式细胞仪检测脾脏中T淋巴细胞总数、T淋巴细胞及吞噬细胞比例、CD4+T细胞、CD8+T细胞比例变化。2.3.不同时间点检测两组小鼠胸腺单个核细胞总数、流式细胞仪检测胸腺中淋巴细胞总数、CD3+淋巴细胞及CD3+淋巴细胞中CD4+T细胞、CD8+T细胞比例变化。3.C57BL/6小鼠为供体,BALB/c小鼠为受体,建立同种异基因小鼠背部皮肤移植模型4.将行皮肤移植后小鼠随机分为三组:oridonin组、环孢素A组、对照组,分别给予腹腔注射oridonin、环孢素A、佐剂,每日测量小鼠体重,观察皮肤移植物排斥时间,不同时间处死小鼠留取血清、流式细胞仪检测小鼠脾脏中调节性T细胞水平变化,取小鼠移植皮片行组织切片观察其病理变化5.ELISA方法检测细胞培养液中以及3组小鼠血清中TGF-β水平统计学方法应用SPSSStatistiCs17.0软件对数据进行统计学处理,根据数据类型不同,小鼠皮肤移植物生存使用Kaplan-Meier绘制方法,小鼠皮肤移植物生存组间的差异用log-ranktest。组间比较用t检验。P<0.05为有统计学意义。所有的数据表示为平均数±标准差。结果1.体外实验Oridonin抑制小鼠脾脏淋巴细胞生长,并且抑制率为浓度剂量-效果依赖形式,半数抑制浓度（IC50）约为2.5μM2.体外实验Oridonin促进小鼠脾脏淋巴细胞凋亡,促进初始的及活化的T细胞凋亡,半数有效浓度（EC50）约为3.5μM,并且为剂量浓度-效应依赖形式,也是时间-效应依赖形式3.体内试验oridonin组小鼠外周血单个核细胞与对照组无明显变化,oridonin组小鼠外周血中T细胞较对照组有明显减少,差异有统计学意义,oridonin组外周血单核细胞比例较对照组增多。4.体内试验早期（8d）,oridonin组小鼠外脾脏细胞与对照组相比,差异无统计学意义,oridonin组小鼠脾脏中T细胞较对照组有明显减少,差异有统计学意义,oridonin组外脾脏中吞噬细胞比例较对照组增多。5.体内试验oridonin组小鼠胸腺细胞总数明显少于对照组,CD3+T细胞比例明显少于对照组,差异均有统计学意义,CD4+、CD8+T细胞较对照组降低更为显着。6.体外实验:低浓度的oridonin能够促使体外TGF-β1表达的上调,高浓度oridonin能够抑制TGF-β1的表达。体内试验:oridonin组小鼠血清中TGF-β1明显高于对照组,环孢素组小鼠血清TGF-β1低于对照组,均有统计学意义。7.Oridonin组小鼠脾脏调节性T细胞明显高于对照组,但是环孢素组小鼠脾脏调节性T细胞明低于对照组。8.Oridonin组小鼠皮肤移植平均排斥时间17天,环孢素A组平均排斥时间为15天,对照组平均排斥时间13.5天,oridonin与环孢素A组相比差异有统计学意义,与对照组相比差异有统计学意义,环孢素A与对照组相比差异无明显统计学意义。9.移植皮肤组织切片示:oridonin组淋巴细胞浸润最轻,环孢素A组次之,对照组淋巴细胞浸润最重,并且高倍镜下每视野淋巴细胞浸润数目oridonin组较对照组差异有统计学意义。10.晚期（18d）,oridonin组小鼠外脾脏体积明显小于对照组,细胞总数少于对照组,oridonin组小鼠脾脏中T细胞较对照组有明显减少,差异有统计学意义,oridonin组第18天小鼠脾脏中吞噬细胞明显少于第8天吞噬细胞,oridonin组外脾脏中吞噬细胞比例较对照组有上调。11.Oridonin组小鼠体重较环孢素A组与对照组均有下降。结论1.Oridonin可以抑制淋巴细胞增殖,促进T细胞凋亡2.oridonin通过促进凋亡、耗尽外周以及中枢T淋巴细胞,上调调节性T细胞表达,诱导同种异基因小鼠皮肤移植免疫耐受能力增强,能够显着延长同种异基因小鼠移植皮肤排斥时间。3.Oridonin副作用小,可能是一种极具应用前景的、可用于移植术后治疗的潜在药物。
张彦明[10]（2011）在《自然杀伤T细胞在异基因造血干细胞移植aGVHD中的免疫调控研究》文中提出目的:探讨小鼠体外Ⅰ型NKT细胞扩增培养体系的建立及体内实施α-GalCer负载的树突状细胞（α-GalCer-loaded DC）对小鼠NKT细胞的扩增活化效应。方法:C57BL/6小鼠脾细胞分别在含α-GalCer （100 ng/ml）、α-GalCer （100 ng/ml） + IL-2 （100 IU/ml）和α-GalCer （100 ng/ml） + IL-2 （100 IU/ml） + IL-7 （20 ng/ml）的体外扩增体系扩增培养。体内分2组分别注射α-GalCe（r2μg/mouse）和α-GalCer-loaded DC（1×106/mouse）扩增NKT细胞。采用α-GalCer-loaded CD1d tetramer和TCRβ单抗双标记流式细胞术检测NKT细胞比例,比较不同培养体系NKT细胞的扩增效率。免疫磁珠分选α-GalCer-loaded DC体内扩增的NKT细胞并进行纯度鉴定。ELISA法测定体内、体外扩增第7天小鼠血清、培养上清中的IL-4、IFNγ水平。结果:体外扩增培养第8天,α-GalCer、α-GalCer + IL-2、α-GalCer + IL-2 + IL-7三组NKT细胞比例分别为（8.70±1.97）%、（27.28±5.26）%、（51.25±7.80）%,α-GalCer + IL-2和α-GalCer + IL-2 + IL-7较α-GalCer具有显着的统计学意义的（P<0.01）,α-GalCer + IL-2 + IL-7较α-GalCer + IL-2扩增比例显着增加（P=0.0327）。体内扩增体系中,α-GalCer组和α-GalCer-loaded DC组在C57BL/6小鼠脾细胞和胸腺细胞中,NKT细胞比例分别为:（15.46±2.63）%、（28.89±3.92）%;（38.41±3.91）%、（52.46±5.23）%。脾细胞中α-GalCer-loaded DC组较α-GalCer组具有明显的扩增效率（P=0.0315）;胸腺细胞中,虽然α-GalCer-loaded DC组的扩增比例高于α-GalCer组,但无统计学意义（P>0.05）。免疫磁珠分选NKT细胞纯度高于90%。ELISA测定结果显示:α-GalCer-loaded DC较α-GalCer显着增加血清IL-4、IFNγ的分泌（P=0.0406,P=0.0129）;α-GalCer + IL-2和α-GalCer + IL-2 + IL-7较α-GalCer明显增加培养上清中IL-4、IFNγ分泌,α-GalCer + IL-2 + IL-7和α-GalCer + IL-2比较无统计学意义（P>0.05）。结论:体外采用α-GalCer联合IL-2可有效扩增NKT细胞,加用IL-7可明显提高扩增效率。体内实施α-GalCer-loaded DC可显着扩增NKT细胞。体内外扩增活化的NKT细胞可分泌大量IL-4和IFNγ。目的:建立C57BL/B6→BALB/c小鼠清髓性异基因骨髓移植aGVHD模型。方法:25只SPF级BALB/c小鼠随机分为5组,各组小鼠分别接受7 Gy、7.5 Gy、8 Gy、8.5 Gy、9 Gy X射线全身照射（TBI）。20只BALB/c小鼠经预处理后随机分为4组,分别尾静脉输注1×106、2.5×106、5×106、10×106个骨髓细胞重建造血。在能重建造血的基础上建立aGVHD模型。为确定诱发不同程度aGVHD的脾细胞剂量,在输注骨髓细胞10×106基础上输注1×106、5×106、10×106个脾细胞,每个剂量组5只BALB/c小鼠。移植后观察aGVHD表现和生存率,23周取皮肤、肝脏、回肠进行病理组织学检查,34周进行嵌合度检测。结果:接受7 Gy剂量的小鼠,生存率为20%,中位生存期为22天;接受7.5 Gy、8 Gy、8.5 Gy、9 Gy剂量的小鼠全部死于造血衰竭,中位生存期分别为18、12、9、7天。四组生存时间采用Log-rank检验,χ2=18.85,P<0.0001。输注1×106、2.5×106骨髓细胞不能全部重建造血,60天生存率分别为40%和60%。输注5×106、10×106骨髓细胞可全部重建造血,60天生存率100%。四组生存时间采用Log-rank检验,χ2=6.78,P=0.0092。单纯输注骨髓细胞不能诱发aGVHD。低剂量脾细胞输注小鼠aGVHD程度轻,仅出现20% aGVHD相关死亡,中剂量和高剂量脾细胞输注小鼠均出现中重度aGVHD,一月内全部死亡（P<0.0001）。中重度aGVHD小鼠皮肤、肝脏和肠道可见明显的病理学改变。+28天脾细胞均达到完全供者嵌合体状态。结论: TBI 7.5 Gy以上对于BALB/c小鼠是致死性预处理。预处理后输注5×106以上骨髓细胞可全部重建造血。输注5×106以上脾细胞可诱发中重度aGVHD。确定8.5 Gy预处理,输注1×107骨髓细胞和5×106脾细胞建立清髓性异基因骨髓移植aGVHD模型。目的:探讨α-GalCer-loaded DC输注移植小鼠以扩增活化宿主残存Ⅰ型NKT细胞,观察其对小鼠异基因造血干细胞移植aGVHD的影响。另外,采用经α-GalCer-loaded DC体内扩增活化的宿主Ⅰ型NKT细胞输注,观察宿主NKT细胞过继免疫治疗对小鼠异基因造血干细胞移植aGVHD的抑制效应。方法:在C57BL/B6→BALB/c小鼠清髓性异基因骨髓移植aGVHD模型中,分组如下:（1）α-GalCer和α-GalCer-loaded DC组:①BMT对照组:BMCs 1×107;②GVHD对照组:BMCs 1×107 + SCs 5×106;③α-GalCer组:BMCs 1×107 + SCs 5×106 +α-GalCer（2μg/mouse）;④α-GalCer-loaded DC1组:BMCs 1×107 + SCs 5×106 +α-GalCer-loaded DC（1×105）;⑤α-GalCer-loaded DC2组:BMCs 1×107 + SCs 5×106 +α-GalCer-loaded DC（5×105）⑥α-GalCer-loaded DC3组:BMCs 1×107 + SCs 5×106 +α-GalCer-loaded DC（1×106）。（2）宿主NKT细胞输注组:①BMT对照组:BMCs 1×107;②GVHD对照组:BMCs 1×107 + SCs 5×106;③宿主NKT细胞输注1组:BMCs 1×107 + SCs 5×106 + NKT（5×105）;④宿主NKT细胞输注2组:BMCs 1×107 + SCs 5×106 + NKT（1×106）。移植后采用临床GVHD积分评价各组小鼠aGVHD严重程度;病理组织学检查评价皮肤、肝脏、小肠的病理损伤;Log-rank检验各组生存率;ELISA法测定移植后第7天小鼠血清中的IL-4、IL-10、IFNγ、TNFα和CCL8水平。此外,模拟allo-BMT可能出现的体内异基因反应建立体外混合淋巴细胞反应（MLR）体系,观察实施α-GalCer-loaded DC和宿主NKT细胞输注对异源性供者T淋巴细胞增殖效应的影响。以C57BL/6供鼠来源的脾细胞（H2b）作为反应细胞,以丝裂霉素C去增殖的α-GalCer-loaded DC体内刺激的BALB/c受鼠脾细胞（H2d）（SCs stimulated by DC）、未经α-GalCer-loaded DC刺激的BALB/c受鼠脾细胞（H2d）（SCs without stimulation）和宿主NKT细胞（Host NKT cells）、宿主NKT阴性T细胞（Host NKT- T cells）作为刺激细胞,在不同浓度梯度下3H掺入法检测H2b脾细胞（反应细胞）的增殖效应。结果:骨髓移植对照组BALB/c小鼠不出现GVHD表现。GVHD对照组小鼠出现中到重度的aGVHD表现。α-GalCer组、α-GalCer-loaded DC1（1×105）组、α-GalCer-loaded DC2（5×105）组、宿主NKT细胞输注（5×105）1组和宿主NKT细胞输注（1×106）2组临床GVHD评分均低于GVHD对照组（P<0.05）,其中,以α-GalCer-loaded DC2（5×105）组和宿主NKT细胞输注（1×106）2组减低最为明显;α-GalCer-loaded DC3（1×106）组则出现与GVHD对照组相似或加重的GVHD表现。GVHD对照组小鼠出现明显的皮肤、肝脏和肠道病理改变。α-GalCer-loaded DC（5×105）组和宿主NKT细胞输注组（1×106）小鼠aGVHD靶器官病理改变较GVHD对照组轻。移植后观察100天,GVHD对照组和α-GalCer-loaded DC（31×106）组小鼠1月内全部死亡。α-GalCer组（28.6%,2/7）、α-GalCer-loaded DC1（1×105）组（16.7%,1/6）、α-GalCer-loaded DC2（5×105）组（50.0%;4/8）较对照组显着提高生存率（P<0.0001）;α-GalCer-loaded DC2（5×105）组较α-GalCer组和α-GalCer-loaded DC1（1×105）组能明显改善生存率（P=0.0243,P=0.0097）。宿主NKT细胞输注（5×105）1组（28.6%,2/7）和宿主NKT细胞输注（1×106）2组（37.5%;3/8）较对照组显着提高生存率（P<0.0001）;二者相互比较生存率无统计学意义（P>0.05）。ELISA测定细胞因子结果显示:α-GalCer组和α-GalCer-loaded DC（5×105）组较GVHD对照组显着增加IL-4、IL-10的分泌（P<0.0001）;α-GalCer-loaded DC（5×105）组IL-4的分泌较α-GalCer组明显增加（P=0.0176）;IFNγ、TNFα在α-GalCer组、α-GalCer-loaded DC（5×105）组、GVHD对照组都呈现较高水平,无统计学意义（P>0.05）;α-GalCer-loaded DC（1×106）组较α-GalCer-loaded DC（5×105）组IFNγ、TNFα分泌水平更高（P<0.05）;宿主NKT细胞输注组（1×106）较GVHD对照组显着增加IL-4、IL-10的分泌（P<0.0001）,而IFNγ明显减少（P=0.0361）;CCL8在各组都明显增加,无统计学意义（P>0.05）。混合淋巴细胞反应结果显示,SCs stimulated by DC较SCs without stimulation能显着抑制H2b脾细胞的增殖反应,且抑制强度呈剂量依赖性（P<0.05）。异源性宿主NKT细胞对H2b反应细胞的增殖有显着抑制作用,且抑制强度呈剂量依赖性,而宿主NKT阴性T细胞则无抑制效应（P<0.01）。结论:小鼠异基因骨髓移植后实施适宜剂量的α-GalCer loaded DC和宿主Ⅰ型NKT细胞输注能显着抑制GVHD的病理进程、明显改善生存率,其机制主要是通过α-GalCer loaded DC刺激宿主残存NKT细胞的活化,NKT细胞分泌大量Th2型细胞因子,并抑制异源性T淋巴细胞的增殖活化而共同发挥作用。目的:采用经α-GalCer-loaded DC体内扩增活化的供者Ⅰ型NKT细胞输注,探讨供者NKT细胞过继免疫治疗对小鼠异基因造血干细胞移植aGVHD的免疫调控效应。方法:在C57BL/B6→BALB/c小鼠清髓性异基因骨髓移植aGVHD模型中,分组如下:①BMT对照组:BMCs 1×107;②GVHD对照组:BMCs 1×107 + SCs 5×106;③供者NKT细胞输注1组:BMCs 1×107 + SCs 5×106 + NKT（5×105）;④供者NKT细胞输注2组:BMCs 1×107 + SCs 5×106 + NKT（1×106）。移植后采用临床GVHD积分评价各组小鼠aGVHD严重程度;病理组织学检查评价皮肤、肝脏、小肠的病理损伤;Log-rank检验各组生存率;ELISA法测定移植后第7天小鼠血清中的IL-4、IL-10、IFNγ、TNFα和CCL8水平。建立体外混合淋巴细胞反应（MLR）体系,以C57BL/6小鼠来源的脾细胞（H2b）作为反应细胞,以BALB/c小鼠来源的丝裂霉素C去增殖的脾细胞（H2d）作为刺激细胞,并在该MLR体系中加入不同数量的去增殖C57BL/6供鼠（H2b）来源的分选NKT细胞（Donor NKT cells）、NKT阴性T细胞（Donor NKT- T cells）。3H掺入法检测H2b脾细胞（反应细胞）的增殖效应。结果:骨髓移植对照组BALB/c小鼠不出现GVHD表现。GVHD对照组小鼠出现中到重度的GVHD表现。供者NKT细胞输注1组（5×105）和2组（1×106）GVHD临床评分低于GVHD对照组（P<0.05）。供者NKT细胞输注组（1×106）小鼠皮肤、肝脏和肠道病理改变较GVHD对照组减轻。移植后观察100天, GVHD对照组小鼠1月内全部死亡。供者NKT细胞输注1组（5×105）和2组（1×106）较GVHD对照组显着提高生存率（P<0.0001）;供者NKT细胞输注2组（1×106）生存率（42.9%,3/7）高于NKT细胞输注1组（5×105）（25.0%,2/8）（P=0.0375）。ELISA测定细胞因子结果显示:供者NKT细胞输注组（1×106）较GVHD对照组显着增加IL-4、IL-10的分泌（P<0.0001）;IFNγ、TNFα、CCL8在供者NKT细胞输注组和GVHD对照组无统计学意义（P>0.05）。混合淋巴细胞反应结果显示,在加入2×105时,供者NKT细胞较NKT阴性T细胞对H2b反应细胞的增殖具有明显抑制作用（P=0.0382）结论:小鼠异基因骨髓移植后实施α-GalCer-loaded DC体内扩增活化的供者Ⅰ型NKT细胞输注可明显改善aGVHD的临床表现和病理改变、显着提高生存率,其机制主要是通过促进Th2型细胞因子的分泌和抑制供者T淋巴细胞的增殖活化而产生aGVHD抑制作用。目的:观察异基因造血干细胞移植患者Vα24+Vβ11+ NKT细胞的重建及移植物和外周血NKT细胞数量对aGVHD的影响。方法:2010年5月至2010年10月在苏州大学附属第一医院血液科接受异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）的38例患者中,男性20例、女性18例,中位年龄3（31355）岁。实施同胞全相合骨髓移植（MSD-BMT）患者20例,同胞全相合外周血干细胞移植（MSD-PBSCT）患者4例,无关供者全相合外周血干细胞移植（MUD-PBSCT）11例,单倍型骨髓移植（HID-BMT）3例。取骨髓和外周干细胞的移植物、移植患者+30、+60、+90天及aGVHD发生时的外周抗凝血,分离MNC以APC-CD3、PE-TCRVα24、FITC-TCRVβ11单抗进行三色标记,流式细胞术检测Vα24+Vβ11+ NKT细胞比例。分析发生aGVHD和未发生aGVHD患者的移植物和外周血NKT细胞数量对aGVHD的影响。结果:38例allo-HSCT患者均获得造血重建。aGVHD总发生率63%,其中ⅠⅠ度50%,ⅢⅢ度13%。+30、+60、+90天外周血NKT细胞比例分别为:BMT组（0.37±0.10）%、（0.34±0.09）%、（0.48±0.16）%,PBSCT组（0.33±0.07）%、（0.63±0.19）%、（0.55±0.15）%。PBSCT组在+60天明显高于BMT组（P=0.0462）。MSD-BMT中,发生aGVHD和未发生aGVHD患者输注NKT细胞数量和外周NKT细胞数量分别为（0.33±0.06）×106/kg、（0.40±0.10）×106/kg（P>0.05）和（0.9±0.18）×106/L、（1.1±0.25）×106/L（P>0.05）。MUD-PBSCT中,发生aGVHD和未发生aGVHD患者输注NKT细胞数量和外周NKT细胞数量分别为（0.29±0.07）×106/kg、（0.26±0.09）×106/kg（P>0.05）和（1.2±0.24）×106/L、（1.0±0.21）×106/L（P>0.05）。表明移植物和外周血中NKT细胞的绝对数量不影响aGVHD的发生和程度。结论:异基因造血干细胞移植患者NKT细胞的重建骨髓移植慢于外周血干细胞移植,输注NKT细胞数量和外周血NKT细胞数量不影响aGVHD的发生和严重程度。
二、异基因外周血干细胞的动员、检测及临床移植的应用研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、异基因外周血干细胞的动员、检测及临床移植的应用研究（论文提纲范文）
（1）阻断CXCR4对移植物抗白血病效应与移植物抗宿主病影响的研究（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 趋化因子及其受体 |
| 1.2 趋化因子CXCL12及其受体CXCR4 |
| 1.2.1 CXCL12/CXCR4概述 |
| 1.2.2 CXCL12/CXCR4在生理过程与病理状态中的作用 |
| 1.3 CXCR4在急性髓系白血病中的研究进展 |
| 1.3.1 CXCR4在AML细胞向骨髓归巢及定居中的作用 |
| 1.3.2 AML细胞CXCR4的表达与调控 |
| 1.3.3 CXCR4表达与AML患者临床特征及预后的关系 |
| 1.3.4 CXCR4作为AML治疗靶点的研究进展 |
| 1.4 CXCR4在急性淋巴细胞白血病中的研究进展 |
| 1.4.1 CXCR4在ALL病理机制中的作用 |
| 1.4.2 ALL细胞CXCR4的表达与调控 |
| 1.4.3 CXCR4与ALL细胞髓外浸润 |
| 1.4.4 CXCR4在ALL中的预后意义 |
| 1.4.5 CXCR4作为ALL治疗靶点的研究进展 |
| 1.5 CXCL12/CXCR4在造血干细胞移植中的研究进展 |
| 1.5.1 阻断CXCR4在造血干细胞动员中的应用 |
| 1.5.1.1 阻断CXCR4与自体造血干细胞动员 |
| 1.5.1.2 阻断 CXCR4 与 allo-HCT 供者造血干细胞动员 |
| 1.5.1.3 其他阻断 CXCR4 的动员剂 |
| 1.5.2 阻断CXCR4在allo-HCT预处理中的应用 |
| 1.5.3 阻断CXCR4在allo-HCT后的应用 |
| 1.6 总结与展望 |
| 第2章 阻断CXCR4增强异基因淋巴细胞回输后移植物抗白血病效应 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 患者白血病样本与异基因淋巴细胞样本采集 |
| 2.2.2 实验动物 |
| 2.2.3 主要实验试剂、耗材与仪器 |
| 2.2.4 主要溶液配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 临床患者白血病细胞分离 |
| 2.3.2 患者来源异种移植模型(PDX)构建 |
| 2.3.3 异基因淋巴细胞分离与回输 |
| 2.3.4 AMD3100皮下注射 |
| 2.3.5 小鼠外周血细胞流式细胞仪检测 |
| 2.3.6 牺牲小鼠检测各脏器白血病细胞 |
| 2.3.7 统计学方法 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 本研究3例B-ALL患者临床特征 |
| 2.4.2 患者B-ALL细胞CXCR4表达及其体内动员反应 |
| 2.4.3 ALI来源的正常B细胞在PDX小鼠体内快速消失 |
| 2.4.4 ALI联合AMD3100可有效清除PDX小鼠骨髓白血病细胞 |
| 2.4.5 化疗预处理桥接ALI联合AMD3100可有效清除高白血病负荷PDX模型小鼠骨髓白血病细胞 |
| 2.5 讨论 |
| 第3章 阻断CXCR4增强异基因造血干细胞移植后移植物抗白血病效应 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验细胞 |
| 3.2.2 实验动物 |
| 3.2.3 主要实验试剂、耗材与仪器 |
| 3.2.4 主要溶液配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 原代白血病小鼠的构建 |
| 3.3.2 小鼠allo-HCT |
| 3.3.3 AMD3100皮下注射 |
| 3.3.4 小鼠外周血白血病细胞的检测 |
| 3.3.5 受体小鼠各脏器流式检测 |
| 3.3.6 统计学方法 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 Notch1-T-ALL与MLL-AF9-AML细胞CXCR4表达与体内动员反应 |
| 3.4.2 AMD3100增强allo-HCT后GVL效应 |
| 3.4.3 AMD3100与allo-HCT后受体小鼠外周血供体T细胞扩增有关 |
| 3.4.4 AMD3100与allo-HCT后受体小鼠外周血供体CD8+记忆T细胞扩增有关 |
| 3.5 讨论 |
| 第4章 阻断CXCR4对移植物抗宿主病与供体造血细胞植入的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验细胞 |
| 4.2.2 实验动物 |
| 4.2.3 主要实验试剂、耗材与仪器 |
| 4.2.4 主要溶液配制 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 原代T-ALL种子小鼠的构建 |
| 4.3.2 流式染色检测调节性T细胞 |
| 4.3.3 小鼠异基因造血干细胞移植 |
| 4.3.4 AMD3100皮下注射 |
| 4.3.5 小鼠急性与慢性GVHD模型的评估 |
| 4.3.6 小鼠活体骨髓穿刺 |
| 4.3.7 组织病理检测 |
| 4.3.8 小鼠外周血白血病细胞的检测 |
| 4.3.9 受体小鼠各脏器流式检测 |
| 4.3.10 统计学方法 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 小鼠骨髓免疫细胞CXCR4的表达及其对AMD3100的动员反应 |
| 4.4.2 AMD3100对allo-HCT后急性GVHD的影响 |
| 4.4.3 AMD3100对allo-HCT后慢性GVHD的影响 |
| 4.4.4 AMD3100对allo-HCT后供体细胞植入的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在校期间的学术业绩 |
| 致谢 |
（2）MAC-haplo-HDPSCT后CMV、EBV感染的相关研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 研究内容及方法 |
| 1 研究对象 |
| 1.1 纳入及排除标准 |
| 1.2 病例资料的临床特点 |
| 2 内容及方法 |
| 2.1 预处理方案 |
| 2.2 移植物抗宿主病(GVHD)的防治 |
| 2.3 一般支持及细菌、真菌感染的预防 |
| 2.4 病毒感染的诊断与防治 |
| 2.5 外周血造血干细胞输注 |
| 2.6 干细胞的植入 |
| 3 统计方法 |
| 4 技术路线图 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
| 导师评阅表 |
（3）单倍体相合外周血造血干细胞移植治疗恶性血液病的预后研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 第一部分 单倍体相合外周血造血干细胞移植治疗恶性血液病的疗效和预后因素分析 |
| 1 引言 |
| 2 资料和方法 |
| 3 结果 |
| 4 单倍体相合外周血造血干细胞移植预后因素分析 |
| 5 讨论 |
| 6 结论 |
| 第二部分 单倍体相合外周血造血干细胞移植后血小板减少及预后意义 |
| 1 引言 |
| 2 资料和方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 单倍体相合造血干细胞移植治疗恶性血液病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 在学期间发表学术论文 |
| 致谢 |
（4）造血干细胞生物学及临床应用研究概况（论文提纲范文）
| 1 造血干细胞及其生物学特性 |
| 1.1 造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)的发现 |
| 1.2 HSC的生物学特性 |
| 1.2.1 自我更新 |
| 1.2.2 多向分化 |
| 1.2.3 凋亡和基因组稳定性 |
| 1.2.4 静息状态 |
| 1.2.5 运动迁移(trafficking) |
| 2 造血干细胞移植发展简史 |
| 3 造血干细胞移植临床应用现状 |
| 3.1 骨髓移植(bone marrow transplantation,BMT) |
| 3.2 外周血动员干细胞移植(peripheral blood stem cell transplantation,PBSCT) |
| 3.3 脐血造血干细胞移植 |
| 4 HSC临床应用挑战与发展前景 |
| 4.1 移植并发症与复发 |
| 4.2 造血干细胞来源匮乏及数量不足 |
| 4.3 早期植入不良 |
| 5 发展前景 |
| 5.1 HSCT与基因治疗 |
| 5.2 HSCT与CAR-T技术 |
| 5.3 HSCT与实体器官移植 |
（5）亲缘间HLA单倍体相合非体外去T细胞高剂量PBSCT治疗恶性血液肿瘤及移植后aGVHD与共刺激分子B7家族关系的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 亲缘HLA单倍体相合非体外去T细胞高剂量外周血造血干细胞移植治疗恶性血液肿瘤的临床疗效研究 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 患者资料 |
| 1.2 入组与排除标准 |
| 1.3 预处理方案设计 |
| 1.4 加强的GVHD预防方案 |
| 1.5 干细胞动员和采集 |
| 1.6 加强的感染的预防和治疗 |
| 1.7 移植物植入及造血重建的判断 |
| 1.8 aGVHD的治疗 |
| 1.9 观察指标 |
| 1.10 aGVHD的诊断和分度标准 |
| 1.11 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 亲缘HLA单倍体相合非体外去T细胞高剂量外周血造血干细胞移植后免疫重建及aGVHD对免疫重建影响的研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 移植过程 |
| 1.3 研究方法 |
| 1.4 统计方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 亲缘间HLA单倍体相合非体外去T细胞高剂量外周血造血干细胞移植后B7 家族的变化及a GVHD对其影响的初步研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 移植过程 |
| 1.3 患者标本采集流程 |
| 1.4 Th1/Th2/Th17 细胞因子的检测方法(CBA) |
| 1.5 B7 共刺激分子的检测方法(ELISA) |
| 1.6 统计方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 单倍体异基因造血干细胞移植的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评表 |
（6）环磷酰胺在移植治疗再生障碍性贫血中的应用及对造血功能的影响（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 临床资料 |
| 2.2 动物实验 |
| 2.3 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 临床移植效果 |
| 3.2 动物实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（7）白消安为主的预处理方案治疗急性白血病（论文提纲范文）
| 主要符号和缩略语说明 |
| 第一部分 白消安为主的预处理方案治疗急性淋巴细胞白血病 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 绪论 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 白消安为主的预处理方案治疗复发难治急性非淋巴细胞白血病 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 绪论 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 附录 发表及待发表的文章 |
| 致谢 |
（8）NK细胞调节移植物抗宿主病中同种反应性T细胞应答的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 目次 |
| 1. 第一章：Allo-HSCT后NK细胞及其受体的重建与aGVHD的关系 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 临床病例资料和实验材料 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 实验结果 |
| 1.5 讨论 |
| 2 第二章：NK细胞抑制aGVHD中同种反应性T细胞应答的作用和机制 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料、试剂与仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.5 讨论 |
| 3 第三章：干细胞动员剂和酪氨酸激酶抑制剂对NK细胞的aGVHD调节作用的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验试剂与仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.4 结果 |
| 3.5 讨论 |
| 4.总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在读期间所取得的科研成果和奖励 |
（9）Oridonin抑制移植排斥的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 5 参考文献 |
| 综述部分 临床移植耐受 |
| 免疫耐受的历史和早期的免疫耐受的研究 |
| 诱导人体免疫耐受的研究障碍 |
| 免疫屏障 |
| 移植耐受的设计 |
| 总结和临床意义 |
| 参考文献 |
| 个人简历及在校期间发表的学术论文 |
| 在校期间发表学术论文 |
| 致谢 |
（10）自然杀伤T细胞在异基因造血干细胞移植aGVHD中的免疫调控研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 技术路线 |
| 第一部分 小鼠NKT 细胞体内外扩增、纯化和鉴定 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 建立小鼠异基因骨髓移植aGVHD 模型 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 宿主NKT 细胞在小鼠异基因骨髓移植aGVHD 中的免疫调控效应 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 供者NKT 细胞输注在小鼠异基因骨髓移植aGVHD 中的调控效应 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第五部分 Vα24+Vβ11+ NKT 细胞在异基因造血干细胞移植患者的重建及对aGVHD 影响的初步研究 |
| 前言 |
| 对象与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述：NKT 细胞与GVHD的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间公开发表的论文 |
| 中英文缩略词汇表 |
| 致谢 |
四、异基因外周血干细胞的动员、检测及临床移植的应用研究（论文参考文献）
- [1]阻断CXCR4对移植物抗白血病效应与移植物抗宿主病影响的研究[D]. 苏龙. 吉林大学, 2021(01)
- [2]MAC-haplo-HDPSCT后CMV、EBV感染的相关研究[D]. 王璐. 新疆医科大学, 2020(07)
- [3]单倍体相合外周血造血干细胞移植治疗恶性血液病的预后研究[D]. 王静. 郑州大学, 2019(02)
- [4]造血干细胞生物学及临床应用研究概况[J]. 郝莎,董芳,胡林萍,程涛. 中国细胞生物学学报, 2018(S1)
- [5]亲缘间HLA单倍体相合非体外去T细胞高剂量PBSCT治疗恶性血液肿瘤及移植后aGVHD与共刺激分子B7家族关系的研究[D]. 徐建丽. 新疆医科大学, 2018(01)
- [6]环磷酰胺在移植治疗再生障碍性贫血中的应用及对造血功能的影响[D]. 黄晴. 安徽医科大学, 2017(01)
- [7]白消安为主的预处理方案治疗急性白血病[D]. 唐暐. 上海交通大学, 2015(02)
- [8]NK细胞调节移植物抗宿主病中同种反应性T细胞应答的作用及机制研究[D]. 盛立霞. 浙江大学, 2014(04)
- [9]Oridonin抑制移植排斥的机制研究[D]. 郭文治. 郑州大学, 2014(05)
- [10]自然杀伤T细胞在异基因造血干细胞移植aGVHD中的免疫调控研究[D]. 张彦明. 苏州大学, 2011(06)
标签：急性淋巴细胞性白血病论文; 急性髓性白血病论文; 慢性粒细胞白血病论文; 干细胞论文; 造血干细胞移植论文;