一、肝组织器官工程血管化的研究进展（论文文献综述）
张强[1]（2021）在《基于肝窦内皮细胞微尺度生物力学性质研究芪术颗粒抗肝纤维化机制》文中指出肝纤维化（Hverfibrosis,LF）是肝胆系统疾病中的常见病,并且是大多数慢性肝病发展的必然阶段。目前医学界普遍认为早期肝纤维化能够逆转,但如何进行逆转,目前尚未形成普遍的共识。肝纤维化早期产生的诸多病理变化中,人们对肝窦内皮细胞（sinusoidal endothelial cells,SECs）的病理变化给予的关注逐渐增多,其特征性的细胞学行为改变包括“窗口”尺寸与数量的变化以及连续性基底膜的形成,一旦SECs发生去窗口化后,则肝纤维化的进程难以逆转,目前这已是不争的事实。目前针对肝纤维化的治疗,现代医学尚且只能给予病因治疗,针对肝纤维化本身而言,目前还没有疗效肯定的药物或治疗手段问世。中医药学在治疗肝纤维化方面的经验历史较长,并对其发病机制形成了完整的认识,尤其是在治未病思想指导下,针对慢性肝病给予早期干预,这在一定程度上能够降低患者未来发生肝纤维化、肝硬化的风险。芪术颗粒是姚乃礼教授经过多年的临床经验总结,结合目前中医药学界对肝纤维化的普遍认识基础上创制的治疗肝纤维化常用方,本课题在国家自然基金“基于肝窦内皮细胞微尺度生物力学性质研究芪术颗粒抗肝纤维化机制”（NO:81774282）的资助下,结合课题组前期的研究成果探讨益气活血方芪术颗粒治疗肝纤维化的机制。1.基于益气活血法治疗肝纤维化临床疗效的Meta分析目的:以Meta分析的方法评价益气活血法治疗肝纤维化的临床疗效。方法:1.以PubMed、中国知识基础设施工程数据库、万方数据知识服务平台为检索资料库,检索时间跨度为自建库到2020年12月31日;以检索词“liver fibrosis”、“hepatic fibrosis”为检索词,然后以“effect”或者“efficacy”作为关键词逐篇进行排除;以“肝纤维化”作为检索词进行检索,然后以“临床观察”、“疗效分析”作为关键词逐篇进行排除。以上数据库没有语言限制。2.纳入随机对照临床研究类文献,以肝纤维化四项、肝脏瞬时弹性成像、肝脾脏的形态、门脾静脉的宽度、不良反应、安全性等结局指标作为考核指标。结果:本次研究共纳入合格文献共93篇,其中有86篇文献以肝纤维化四项作为临床评价指标,两组对比显示中药组的临床疗效比对照组更好,结果对比具有统计学差异[MD=51.15,95%CI（56.95,45.35）,P<0.00001]。15篇文献以肝硬度值作为临床考核指标,两组对比显示中药组在改善肝硬度值方面具有更好的疗效,比较结果具有统计学差异[MD=3.52,95%CI（4.78,2.26）,P<0.00001]。33 篇文献研究以门静脉直径作为临床考核指标,两组对比显示中药组在改善门静脉直径方面具有更好的疗效,比较结果具有统计学差异[MD=1.20,95%CI（2.14,0.26）,P=0.01]。31篇文献研究以脾脏厚度作为临床考核指标,两组对比显示中药组在改善脾脏厚度方面具有更好的疗效,比较结果具有统计学差异[MD=6.83,95%CI（9.54,4.12）,P<0.00001]。13篇文献研究以脾静脉直径作为临床考核指标,两组对比显示中药组在改善脾静脉直径方面具有更好的疗效,比较结果具有统计学差异[MD=1.77,95%CI（3.04,0.49）,P=0.007]。结论:以益气活血为主要功效的中药组方在治疗肝纤维化方面相较于西药而言具有更好的临床疗效。2.基于肝窦内皮细胞微尺度生物力学性质研究芪术颗粒抗肝纤维化机制目的:（1）研究芪术颗粒对肝纤维化大鼠肝脏炎症因子、肝纤维化指标以及病理组织学的调控作用。（2）通过qRT-PCR、Western blot、免疫荧光法明确芪术颗粒对肝窦内皮细胞eNOSmRNA、eNOS、NO表达的影响。（3）基于多相多级次多孔介质理论,明确芪术颗粒干预下肝窦内皮细胞的力学特征。方法:（1）以四氯化碳作为肝纤维化的诱导剂,构建肝纤维化大鼠模型,造模同时给予芪术颗粒进行干预,通过Elisa法、HE以及Masson染色研究芪术颗粒对肝纤维化大鼠的生化、病理组织学的影响。（2）原位胶原酶灌注+离体消化+梯度密度分离法分离提取肝窦内皮细胞。（3）以10%肝纤维化大鼠血清+5%的胎牛血清作为外在损伤因素作用于体外培养状态的肝窦内皮细胞,模拟体内生化环境,构建肝窦内皮细胞损伤模型。将细胞按照正常对照组、损伤组、正常大鼠血清损伤组、芪术颗粒含药血清低、中、高浓度进行分组。（4）采用 qRT-PCR、Western blot、免疫荧光法检测胞内eNOSmRNA、eNOS、NO的表达情况。（5）基于多相多级次多孔介质理论,采用原子力显微镜表征芪术颗粒干预下肝窦内皮细胞的力学属性。结果:（1）芪术颗粒能够改善肝纤维化大鼠生化指标,改善肝脏病理组织形态。（2）经过细胞形态以及免疫荧光鉴定可知,我们所提取的细胞为大鼠肝窦内皮细胞,且纯度较高。（3）经 qRT-PCR、Western blot、免疫荧光法检测胞内 eNOSmRNA、eNOS、NO显示芪术颗粒含药血清能够上调eNOSmRNA、eNOS、NO的表达。（4）经过芪术颗粒含药血清干预后,肝窦内皮细胞的骨架模量、粘度均有所提高,使肝窦内皮细胞向正常力学状态转变,而其扩散系数无明显变化。结论:（1）芪术颗粒能够抑制肝脏炎症状态,恢复肝脏正常组织形态。（2）芪术颗粒能够上调eNOSmRNA、eNOS、NO的表达,从而改善肝窦内皮细胞的病理状态,这可能是其抗肝纤维化的重要机制之一。（3）芪术颗粒能够改善肝窦内皮细胞的力学状态,促进肝窦内皮细胞向正常力学状态恢复,这可能是其发挥抗肝纤维化的另一重要机制。
孙乐家[2]（2021）在《基于3D生物打印技术构建肝脏相关体外模型》文中研究表明研究背景:近年来3D生物打印技术发展迅速,已成为创建体外组织和器官等生物模型的重要方法之一。3D生物打印皮肤、软骨、胰腺、肾脏、肺和心脏等复杂的组织和器官被陆续报道,这些组织和器官不仅具有人体对应组织和器官的形态特征,部分还具有良好的生物学功能。肝脏是人体最大的消化腺,具备生物合成、药物代谢和凝血等众多关键的生理功能,而药物性肝损伤、病毒性肝炎、肝硬化和肝癌等众多累及肝脏的相关疾病已成为威胁人类健康的主要因素,但目前尚缺少可靠的肝脏相关体外研究模型。我们的研究旨在利用3D生物打印技术构建肝脏和肝癌相关体外模型,并初步验证其功能和应用价值。研究方法:在构建3D生物打印肝脏模型研究中,我们以HepaRG为细胞种子,明胶/海藻酸钠为生物墨水,利用挤出式3D生物打印机构建网格状体外人肝组织（3D bioprinted hepatorganoids,3DP-HOs）。我们首选从生物墨水配比、打印环境温度和细胞诱导方法等三个方面确定3D生物打印和后续细胞培养最佳实验参数,之后从3DP-HOs形态特征、细胞存活染色和CCK8增殖试验等方面验证模型的创建是否成功。3D生物打印肝组织创建成功后,通过qPCR和ELISA检测并比较原代肝细胞、未诱导分化HepaRG、2D诱导培养HepaRG、3D诱导培养HepaRG和3DP-HOs各组肝脏特异基因和蛋白的表达;利用免疫荧光染色验证3DP-HOs特异蛋白的表达;采用PAS染色、ICG摄取和排泄试验及LDL摄取试验评估3DP-HOs特定功能;通过qPCR和P450-Glo TM Assays检测3-甲基胆葱、苯巴比妥钠和利福平诱导前后各组多种CYP450酶的基因表达和活性。最终我们将3DP-HOs移植到肝损伤Fah-/-Rag2-/-小鼠腹腔,通过观察移植的3DP-HOs在体内的融合情况、异哇胍代谢作用和对肝损伤小鼠肝脏相关生理指标和生存期的影响来评估3D生物打印肝组织的体内功能。在利用3D生物打印制造肝癌相关模型探索中,HepG2和明胶-海藻酸钠分别为肝癌细胞和生物墨水,利用同3DP-HOs相似的挤出式3D生物打印工艺创建网格状肝癌模型（3D bioprinted HepG2,3DP-HepG2）。该模型创建的效果从形态特征和细胞存活状态等角度评估。利用Ki67评估3DP-HepG2中细胞增殖情况,采用qPCR技术检测3DP-HepG2和2D培养细胞在肝脏、肝癌、自噬和耐药等方面相关基因的表达,通过免疫荧光评估特征蛋白的表达,借助转录组测序技术和生物信息学分析表征3DP-HepG2和2D培养细胞表达谱和筛选核心差异基因。最后通过顺铂、索拉菲尼和瑞格菲尼药物试验,评估DP-HepG2和2D培养药物反应差异。研究结果:我们最终选择了 4%明胶/1%海藻酸钠作为生物墨水,在10℃（打印室温度）/20℃（材料室温度）环境下成功构建了10×10×3mm3的网格状肝组织。3DP-HOs长期培养可保持90%以上的细胞活力,且稳定增殖。诱导培养7天后,3DP-HOs含82.5%±4.6%白蛋白阳性肝细胞,且在基因表达层面比HepaRG、2D和3D培养组表达更高的 ALB、AAT、CK18、MRP2、Transferrin、FOXA2 和 HNF4A。功能蛋白的定量分析和免疫荧光结果与此一致。CYP诱导试验显示,CYP1A2、CYP2A6、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2D6、CYP3A4 和 CYP3A11 基因表达均可以在 3DP-HOs 中被诱导增强,其中CYP1A2和CYP3A4在药物诱导后活性得到明显增强（2倍以上）。此外,3DP-HOs获得了糖原贮存能力、ICG摄取和排泄能力以及LDL摄取能力。3DP-HOs被移植到小鼠体内后,3DP-HOs改善了Fah-/-Rag2-/-小鼠肝损伤状况,降低了多种氨基酸水平,并最终延长了小鼠生存期。在移植2周后检测发现移植物3DP-HOs具备了血管网络,并可以分泌ALB、AAT、凝血因子Ⅶ、凝血因子Ⅲ和凝血因子Ⅸ等人功能蛋白,且发现3DP-HOs可在体内代谢异哇胍。3DP-HepG2具有DP-HOs同样大小尺寸,模型内的细胞打印后第1到10天始终保持90%左右高细胞活率,Ki67表达呈强阳性。与2D-HepG2相比,3DP-HepG2始终表达更高的ALB、AAT和CYP3A4等肝脏相关基因以及AFP、CD133、EpCAM、IL8和CD24等肿瘤相关基因。转录组分析发现3DP-HepG2具有独特的基因表达谱,尤其在肝功能和肿瘤特异基因上和2D-HepG2差异明显,同时筛选出ALB和NOTUM等核心差异基因。药物试验显示,顺铂、索拉菲尼和瑞格菲尼在3DP-HepG2/2D-HepG2中的IC50分别是 38.56μM/12.03μM,22.07μM/6.53μM和 7.93μM/1.96μM。qPCR 结果显示3DP-HepG2始终表达更高的MRP1、ACBC、MDR1和EGFR等耐药相关基因和Beclin3-1、LC3A、LC3B和Atg5等自噬相关基因。研究结论:基于3D生物打印构建的肝组织具有蛋白合成和药物代谢等良好的肝功能,移植后能改善肝衰小鼠肝损伤、延期生存期,显示出潜在的移植治疗作用;3D生物打印的肝癌组织与2D细胞相比在肝功能和肿瘤特性方面具有独特的生物学特征,在药物筛选方面具有潜在应用价值。
徐蒙[3]（2021）在《LECT2/Tie1信号调控肝纤维化进程的作用和机制研究》文中研究表明肝纤维化是由病毒感染、先天性代谢缺陷、化学毒物以及自身免疫异常等原因引起慢性肝损伤的一种共同病理表现,也是机体对慢性肝损伤的一种修复反应。目前还没有被批准应用于临床的特效药物,所以对于研究其发病机制及寻找潜在的干预靶点变得极为迫切和重要。肝血窦毛细血管化与血管新生在肝纤维化进程中扮演着重要的作用,但是其机制尚未完全阐明清楚。本课题以实验室新发现的LECT2/Tie1信号通路为基础,探讨了其在调控肝血窦毛细血管化与血管新生及肝纤维化进程的作用和机制,为肝纤维化治疗提供了新的策略和理论基础。研究首先发现,白细胞趋化因子2（Leukocyte cell-derived chemotaxin 2,LECT2）在代谢相关脂肪性肝病（Metabolic associated fatty liver disease,MAFLD）病人血清及肝组织样本中表达上调,通过构建多种小鼠慢性肝损伤模型,观察到在野生型（WT）小鼠肝脏出现纤维化损伤时LECT2表达也会上调,而全身性Lect2基因敲除（Lect2-KO）小鼠肝纤维化症状则显着减轻,表明LECT2具有促进肝脏纤维化的作用。利用免疫荧光共定位技术及原代细胞体外实验发现,纤维化时主要表达LECT2的细胞为肝细胞和血管内皮细胞。利用CD31对纤维化肝组织染色发现LECT2在体内对肝内血管具有明显的调控作用:减少汇管区/损伤区周围新生血管数量,促进肝血窦毛细血管化。与野生型（WT）小鼠相比,在Lect2-KO小鼠肝纤维化的汇管区/损伤区可见更多的CD31和VEGFR2双阳性血管。体外细胞实验发现,重组人LECT2蛋白可抑制EA.hy926细胞及原代肝血窦内皮细胞迁移以及成管能力。进一步机制研究发现,LECT2与血管内皮细胞表面受体 Tie1（Tyrosine kinase with immunoglobulin like and EGF like domains 1）的胞外Ig3结构域直接结合,并依赖结合发挥调控血管内皮细胞功能的作用。通过表面等离子体共振（SPR）、交联质谱（XL-MS）和免疫共沉淀（Co-IP）等一系列的实验相互结合,我们进一步找到了 LECT2与Tie1相互作用的关键氨基酸位点,这为后续将抑制两者结合作为靶点干预肝脏纤维化的研究提供了可行性。通过转录组测序比较WT与Lect2-KO小鼠纤维化肝脏中基因表达量的差异,发现PPARγ/MMP信号通路发生了显着变化,LECT2/Tie1信号可以激活PPARγ/MMP信号通路,促进TGF-β1等因子分泌继而活化肝星状细胞,促进胞外基质蛋白分泌,同时下调基质金属蛋白酶MMPs,使得VE-cadherin及胞外基质降解减少,增强内皮细胞之间的连接并增加了胞外基质堆积,抑制血管内皮细胞迁移和血管新生并促进肝血窦毛细血管化,最终促进肝纤维化进程。我们的研究从发现白细胞趋化因子LECT2在肝脏纤维化进展中的作用入手,找到了 LECT2行使功能的关键受体Tie1,明确了两者相互作用的关键氨基酸位点,探讨了 LECT2/Tie1信号在肝脏纤维化中发挥作用的下游机制,为靶向LECT1/Tie1信号治疗肝纤维化提供了坚实的理论和实验基础。
吴崇,冷雪辉[4]（2020）在《3D生物打印在组织工程应用中的技术难题和前景展望》文中研究表明目前,利用3D生物打印技术已能打印出生物的生理功能与结构简单、不具备完整血管和神经系统的体外组织/器官,要实现打印出具有可供移植、具备生物活性和完整生理功能的器官,还需要攻克打印技术和策略、血管和微观通道构建、仿生结构、打印墨水等方面的技术难题。对3D生物打印技术的发展前景及其在组织工程中的应用进行了展望。
许杰[5]（2020）在《基于肝窦毛细血管化探讨抗纤软肝颗粒抗肝纤维化的临床疗效与作用机制》文中研究说明目的:1.从中医学“痰瘀”的角度,评估抗纤软肝颗粒抗肝纤维化的临床疗效及相关数据,为抗纤软肝颗粒抗肝纤维化提供最新的循证医学证据。2.基于网络药理学运用网络数据挖掘技术筛选抗纤软肝颗粒治疗肝纤维化活性成分,并对成分作用潜在靶点与机制进行整合与分析,探究抗纤软肝颗粒抗肝纤维化的药理学机制,为抗纤软肝颗粒抗肝纤维化提供科学依据,以及为后续实验研究提供一定基础。3.通过细胞实验与动物实验,基于肝窦毛细血管化,探讨抗纤软肝颗粒抗肝纤维化的作用机制。方法:1.采用临床回顾性对照研究的方法,从“痰瘀”的角度,研究抗纤软肝颗粒对痰瘀互结型肝纤维化患者临床疗效。将60例慢性乙型肝炎（CHB）肝纤维化患者,分为2组:治疗组患者利用抗纤软肝颗粒联合恩替卡韦（entecavir,ETV）治疗,对照组仅予ETV抗病毒治疗。治疗6个月,比较治疗前后中医证候积分、血清部分肝功能指标、血清肝纤维化及肝脏弹性等指标变化情况。2.采用网络药理学的研究方法,借助Bioinformatics Analysis Tool for Molecular mechANism of Traditional Chinese Medicine（BATMAN-TCM）结合DisGeNET,Genecard,HPO,OMIM疾病靶点数据库,通过构建抗纤软肝颗粒活性成分作用靶点网络与肝纤维化疾病相关靶点网络相互映射来挖掘抗纤软肝颗粒抗肝纤维化作用靶点,利用STRING进行生物过程和通路富集分析,探究抗纤软肝颗粒抗肝纤维化作用机制的通路研究。3.分别采用细胞实验与动物实验的方法:（1）细胞实验中,采取二次重复给药的方式,通过Wistar雄性大鼠制备和提取抗纤软肝颗粒和对照组含药血清,分别处理原代肝窦内皮细胞模型。采用Western-blotting方法检测肝窦内皮标志物分化抗原簇31（CD31）和血管性血友病因子（vWF）的蛋白表达水平,分析抗纤软肝颗粒对肝窦内皮细胞分子水平的影响;采用免疫组织化学的方法检测细胞中CD31、vWF细胞因子表达水平;通过扫描电镜检测肝窦内皮细胞窗孔的变化。（2）动物实验中,通过CCl4--橄榄油混合溶液皮下注射与低蛋白高脂饲料喂养Wistar雄性大鼠诱导肝纤维化动物模型,运用拆方研究的方法,以索拉非尼作为对照药物,研究抗纤软肝颗粒（母方,MF）、母方去鳖甲方（QJ）和鳖甲（BJ）对肝纤维化大鼠一般情况、血清肝功能、肝组织和血清MMP13和TIMP-1分子、肝组织病理学、肝组织肝窦毛细血管化、肝组织肝窦毛细血管化分子水平的影响。另外,对肝组织中NO、NOS、MDA、T-SOD和HYP分子进行测量,观察抗纤软肝颗粒组及其拆方各组对肝组织细胞膜脂质过氧化和酶促防御系统的影响的影响,进而观察其对肝窦毛细血管化的影响。采用生化检测大鼠血清部分肝脏功能ALT、AST、ALB、IgG水平;采用qRT-PCR方法检测大鼠肝组织中MMP-13、TIMP-1和VEGF的mRNA表达水平;采用Western-blotting方法检测肝组织中CD31、vWF、CollagenⅠ和CollagenⅣ的蛋白表达水平;分别采用H&E染色和天狼星红染色检测肝大鼠肝组织病理变化;通过扫描电镜检测大鼠肝组织肝窦内皮细胞窗孔及基底膜的变化;用ELISA法检测大鼠血清中MMP-13、TIMP-1的表达水平;采用生化检测方法检测大鼠肝组织NO、NOS、MDA、T-SOD和HYP指标。结果:1.临床研究结果:抗纤软肝颗粒对慢性乙型肝炎（CHB）肝纤维化痰瘀互结型患者临床研究共收集病例60例,其中男29例,女31例,年龄18-65岁,平均52.5岁,治疗组32例,对照组28例。（1）两组病例在性别、年龄、肝纤维化程度、治疗前主要症状和舌脉积分分布等方面行x2检验,差异无统计学意义（P>0.05）。（2）抗纤软肝颗粒对CHB肝纤维化痰瘀互结型患者临床症状总疗效的影响,结果显示:与对照组相比,治疗组总有效率（84.375%vs60.7 1%）、显效率（53.125%vs28.57%）,差异具有显着统计学意义（P<0.05）。（3）抗纤软肝颗粒对CHB肝纤维化痰瘀互结型患者症候积分的影响及单项症状总有效率比较,结果显示:治疗前两组比较,治疗组与对照组的中医证候积分（23.40±4.14vs22.80±3.85,t=0.5786,P>0.05）;治疗后两组比较,治疗组与对照组的中医证候积分（8.75±3.28vs15.84±4.24,t=7.2916,P<0.01）。两组治疗前后组内比较,治疗后治疗组与对照组中医证候积分均较治疗前下降,差异有显着统计学意义（t=15.6901,P<0.01）。两组对肝纤维化单项症状积分总有效率影响,与对照组比较,治疗组各项单项症状总有效率均显着增高,差异有显着统计学意义（t=11.406,P<0.01）。与对照组相比,抗纤软肝颗粒联合ETV治疗组能显着减轻患者临床症候:右胁隐痛、腹胀、乏力、纳差、便溏、舌暗红/淡暗、苔白腻、脉滑涩等。（4）抗纤软肝颗粒对CHB肝纤维化痰瘀互结型患者部分肝功能指标的影响,结果显示:对照组与治疗组在治疗前后进行组内比较,两组ALT、AST、TBIL、GGT各项指标治疗后均较治疗前下降明显,差异有显着统计学意义（P<0.01）。另外,治疗后两组间比较,治疗组较对照组指标下降幅度更为明显,差异有显着统计学意义（P<0.05）。（5）抗纤软肝颗粒对CHB肝纤维化痰瘀互结型患者肝纤维化指标的影响,结果显示:两组治疗前后进行组内比较,两组HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN指标治疗后均较治疗前下降,差异有显着统计学意义（P<0.01）。治疗后两组组间比较,治疗组较对照组指标下降幅度更为明显,差异有显着统计学意义（P<0.01）。（6）抗纤软肝颗粒对CHB肝纤维化痰瘀互结型患者肝脏弹性的影响,结果显示:两组治疗前后进行组内比较,可见对照组治疗前后指标比较差异无统计学意义（P>0.05）,而治疗组在治疗前后比较,肝脏硬度指标明显下降,差异有显着统计学意义（P<0.01）。另外,两组治疗后组间比较,治疗组较对照组明显降低肝脏硬度指标,差异有显着统计学意义（P<0.01）。2.网络药理学分析结果:在Batman-TCM中输入抗纤软肝颗粒的7种药物,分别搜索到鳖甲1个,丹参39个,地骷髅2个,莪术6个,海藻1个,牡蛎5个,生山楂30个化合物信息,共计84个。通过DisGeNET,Genecard,OMIM,HPO检索并筛选821个肝纤维化疾病相关的靶点,整合筛选出抗纤软肝颗粒成分和肝纤维化交集关键靶点。利用Cytoscape3.7.1软件构建成分-靶点-疾病网络,以大于平均自由度为筛选条件筛选出核心网络,获得95个抗纤软肝颗粒抗肝纤维化的相关靶点。通过STRING的GO功能和途径/通路富集分析得到2203条生物过程,181个分子功能和包括MAPK、JAK-STAT、PI3K-AKT、Toll受体等在内的162条KEGG通路,这些通路为抗纤软肝颗粒在临床中的使用提供更为有力的、可靠的药理学证据。3.实验研究结果:实验一:基于肝窦毛细血管化探讨抗纤软肝颗粒抗肝纤维化作用机制的细胞实验研究,结果显示:（1）抗纤软肝颗粒对肝窦内皮细胞中形态的影响:肝窦内皮细胞经经免疫荧光单标、荧光显微镜观察鉴定。倒置相差显微镜下观察,与对照血清组（Control组）比较,抗纤软肝颗粒含药血清组（MF组）肝窦内皮细胞形态学无明显变化。（2）抗纤软肝颗粒对肝窦内皮细胞窗孔结构的影响:对照组肝窦内皮细胞窗孔狭小,窗孔结构将近闭塞,数量较少,而抗纤软肝方组可见肝窦内皮细胞窗孔结构清晰,窗孔增多增大,明显可见。（3）抗纤软肝颗粒对肝窦内皮细胞CD31和vWF细胞因子的影响:抗纤软肝颗粒组原代肝窦内皮细胞CD31、vWF细胞因子的表达水平较对照组明显降低,差异有显着统计学意义（CD31:0.0688±0.0150vs0.1151±0.0114,t=4.2565,P<0.05;vWF:0.0920±0.0089vs0.1319±0.0135,t=4.2740,P<0.05）。（4）抗纤软肝颗粒对肝窦内皮细胞CD31、vWF蛋白表达的影响:与对照组相比,抗纤软肝颗粒组原代肝窦内皮细胞CD31、vWF的蛋白表达水平明显降低,差异有显着统计学意义（CD31:0.3337±0.0290vs0.4480±0.0128,t=6.2454,P<0.01;vWF:0.5603±0.0472vs0.7093±0.0448,t=3.9658,P<0.05）。实验二:基于肝窦毛细血管化探讨抗纤软肝颗粒抗肝纤维化作用机制的动物实验研究,结果显示:（1）抗纤软肝颗粒对大鼠一般情况的影响:造模组体重增长受到抑制,其它治疗组大鼠体重均有增加。与模型组比较,抗纤软肝颗粒母方组大鼠体重明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）。母方组肝纤维化死亡率和腹水发生率明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。肝脏指数和脾脏指数各组比较无明显统计学差异（P>0.05）。（2）抗纤软肝颗粒对大鼠肝功能的影响:经抗纤软肝颗粒组及其拆方各组治疗后血清ALT、AST、IgG水平显着下降,而血清ALB的水平显着上升,差异有显着统计学意义（P<0.05）。（3）抗纤软肝颗粒对大鼠肝组织及血清MMP13、TIMP-1分子的影响:分别用qRT-PCR和ELISA法测定后显示,抗纤软肝颗粒组及其拆方各组可降低肝组织TIMP-1的mRNA表达水平和血清TIMP-1分子水平,而升高肝组织MMP13的mRNA表达水平和血清MMP13的分子水平,差异有显着统计学意义（P<0.01）。与Sor组比较,母方组可明显调节肝组织和血清MMP13、TIMP-1的表达水平,差异有显着统计学意义（P<0.05）。（4）抗纤软肝颗粒对大鼠肝组织病理学的影响:H&E染色中,抗纤软肝颗粒组及其拆方各组可明显改善大鼠肝组织病理变化、肝细胞变性坏死程度、抑制肝组织内结缔组织增生,尤其是母方组。与Sor组相比,母方组（MF组）肝纤维化改善程度更为明显。在天狼星红染色中,与模型组比较,抗纤软肝颗粒组及其拆方各组纤维组织成分含量明显减少,母方组纤维组织含量降低最为明显。（5）抗纤软肝颗粒对大鼠肝组织肝窦毛细血管化的影响:与模型组相比,抗纤软肝颗粒及其拆方各组肝组织,尤其是抗纤软肝颗粒组可见肝细胞索和肝窦结构较清晰,肝窦沟可显现,肝窦扭曲、狭窄程度明显减轻,甚至消失,基底膜较薄或不连续,有的肝窦结构接近正常,肝窦壁内皮细胞窗孔明显可见,与Sor组相比,母方组大鼠肝组织可见肝窦扭曲、狭窄程度改善最为显着。（6）抗纤软肝颗粒对大鼠肝组织肝窦毛细血管化分子水平的影响:抗纤软肝颗粒组及其拆方各组可显着降低VEGF的mRNA表达水平,与Sor组比较,抗纤软肝颗粒组差异有统计学意义。抗纤软肝颗粒组及其拆方各组可显着降低CD31、vWF、CollagenI、CollagenIV的蛋白水平,尤其是抗纤软肝颗粒组。与Sor组比较,抗纤软肝颗粒对于降低CD31、vWF、CollagenI、CollagenIV的蛋白水平效果更为显着,差异具有统计学意义（P<0.05）。（7）抗纤软肝颗粒对大鼠肝组织中NO、NOS、MDA、T-SOD和HYP分子的影响:抗纤软肝颗粒组及其拆方各组可显着降低MDA、NO、NOS和HYP表达水平,而升高T-SOD表达水平,差异具有统计学意义。与Sor组比较,母方组可明显调节MDA、T-SOD、NO、NOS和HYP的表达水平,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:1.对于治疗CHB肝纤维化痰瘀互结证,抗纤软肝颗粒联合ETV与单用ETV治疗比较,两组均显示一定疗效,均可改善患者临床证候、肝功能和肝纤维化指标。对单用ETV对照组比较,抗纤软肝颗粒联合ETV治疗组对于改善肝纤维化患者临床证候,部分肝功能和肝纤维化指标有明显优势,尤其在改善肝脏硬度方面。抗纤软肝颗粒在肝纤维化“痰瘀互结”证的治疗中起到明显软坚消痰、活血化瘀的抗肝纤维化作用。2.通过网络药理学预测分析发现抗纤软肝颗粒作用肝纤维化的相关机制可能跟MAPK、PI3K-AKT、JAK-STAT、Toll样受体等信号通路密切相关,抗纤软肝颗粒具有抗肝纤维化的药理学依据。3.细胞实验与动物实验研究结果表明,抗纤软肝颗粒对体外原代肝窦内皮细胞和体内大鼠肝纤维化组织肝窦毛细血管化有积极的治疗作用。同时,动物实验中发现,中药复方抗纤软肝颗粒、去鳖甲方与鳖甲均具有明显的抗肝纤维化作用,尤其是母方（抗纤软肝颗粒）疗效最佳。抗纤软肝颗粒对肝纤维化的作用机制,可能是通过抑制肝窦毛细血管化而防治肝纤维化。
田畅[6]（2020）在《基于微流控芯片的声流体混合器及类肝组织模型构建与分析》文中进行了进一步梳理作为一门涉及多学科、多交叉领域的新兴科学技术,微流控技术在近些年得到了快速发展。微流控芯片研究平台具有样品消耗量少、操作简便、自动化与集成化程度高、反应时间短、分析灵敏度高等诸多优势。因为微流控管道的结构尺寸与各类细胞器、真核或原核细胞、细胞群的尺寸大小相似,所以越来越多的研究人员使用微流控技术进行生物学领域的研究。利用微流控技术,可以实现在微米尺度上的时间和空间控制,进而在微流控芯片上进行从溶液到粒子、从细胞到组织各水平的基础研究。本研究以微流控技术为基础,结合声流体技术以及气动阀门技术,分别构建了声流体混合芯片和集成式微流控芯片,并将其成功应用于实现芯片内溶液的快速混合以及类肝组织模型构建。相比于其他声流体混合器件以及体外肝组织模型,该声流体混合器具有连续、稳定、可重复使用的优势,所制备的肝组织模型具有更复杂的三维组织形态以及生理特性。本研究为芯片上分子间相互作用研究以及肝组织工程研究提供新思路。本论文具体研究结果如下:1.本研究设计并制备了一种基于微针的声流体原位混合装置。该声流体装置由两个压电换能器和一个微流控芯片组成。压电换能器能够在电信号作用下,产生声波并作用于芯片中的微针结构,使得微针结构周围产生局部涡旋流,用于管道中溶液的混合。试验中探究了微针结构、压电换能器的驱动频率、驱动电压以及管道中溶液的流速对混合效果的影响,并通过量化计算验证了上述不同条件对溶液混合的影响,得到了具有最佳混合效果的混合条件,并实现了毫秒级快速混合。然后,利用荧光素混合试验以及荧光素猝灭试验,证明该声流体混合装置在原位混合以及化学反应应用方面具有连续（100 min连续试验）、稳定（200次重复试验、以及温度稳定）、可重复使用（22天重复使用）等优异性能。下一步,通过改进芯片结构设计并制备了具有在线浓度控制功能的升级型声流体混合器,并对其混合效果进行了验证。最后,对管道中层流模式下酶促反应的产物生成模式进行了模拟以及验证,提出了适用于酶反应速率评估的计算方法,并进行了酶促反应分析,为分析化学以及生物化学进行分子间相互作用研究提供了方便完整的微流体分析平台。2.本研究设计并制备了集成式微流控芯片,用于类肝组织结构单元构建。该集成式微流控芯片由四层组成,从上至下分别是流动层、控制层、支持层和载玻片层。利用控制层中设计的内层图案化阀门与外层图案化阀门之间的相互作用,进行模拟肝小叶结构仿生制备类肝组织结构单元。试验中探究了阀门压力对内层图案化阀门与外层图案化阀门工作效果的影响,得到了用于独立控制两组阀门的最适工作压力,且阀门之间独立运行没有影响。随后探究了芯片管道修饰在类肝组织结构单元构建以及回收过程中的作用,结果表明利用明胶修饰的芯片管道,可以实现不同细胞的图案化分布,以及芯片上类肝组织结构单元的构建以及回收,且所制备的类肝组织结构单元细胞活力良好,从形态学和生理学角度模拟了体内肝脏的组织微结构。最后利用层层堆叠的方法对类肝组织结构单元进行立体组装,得到了具有复杂三维结构的类肝组织块。所制备的类肝组织块具有良好的细胞活力,且与体内肝组织形态相似,说明类肝组织块具有体外重构肝脏形貌与功能的潜力,为再生医学以及个性化医疗领域中,体外肝组织工程研究提供了新思路与新方法。
郭伟,卢姗,范红,李君[7]（2020）在《肝衰竭修复替代治疗的现状与发展对策》文中研究指明背景:为解决肝移植的临床应用受供肝来源短缺限制的问题,世界各国科学家正在积极探索,相继研究发展了人工肝、组织工程肝脏、异种器官移植等技术手段以期解决缓解器官短缺的问题,从而对肝衰竭起到一个修复或替代的治疗作用。目的:阐述肝衰竭修复替代治疗的发展历程、研究现状和未来预期。方法:检索web of science、万方数据库2000至2019年发表的文献,检索关键词为"artificial liver,liver tissue engineering,hepatic failure,肝衰竭,肝移植"。结果与结论:针对肝衰竭等晚期肝脏疾病,主要有原位肝移植、细胞移植、人工肝系统和组织工程肝脏等修复替代治疗手段。国内目前已有多家医院和机构自主研发了人工肝装置,尽管生物型人工肝和混合型人工肝在肝衰竭治疗上展现出很好的发展前景,但大多仍处于动物实验阶段,未来应加大生物反应器的研发力度,增强支架内的细胞活率。利用生物材料和种子细胞构建的组织工程肝脏可以在一定程度上模拟肝脏的合成、解毒、代谢和分泌等生理性功能,可经体内移植治疗终末期肝病,是组织功能领域的研究热点,而解决生物支架体内移植的凝血问题、促进支架的血管化形成是该领域的需要努力的方向。异种移植是解决人类器官供体严重短缺的最佳途径,但该技术距离临床应用依然还有很长的路要走。
刘辰[8]（2020）在《基于组合模具法及静电纺丝技术的人工血管材料的基础研究》文中研究说明心血管疾病作为全国死亡的首要原因,其治疗方法一直以来都备受关注。对于心血管疾病,血管移植是最好的治疗手段。由于自体移植物来源有限,人工血管的研究一直以来都是热点话题。生物型人工器官构建最重要的挑战之一就是血管化。器官中各种细胞都需要一个稳定而灵活的微血管网络来提供氧气和营养物质。其中模仿细胞微环境诱导干细胞形成成熟的微血管已被证明是一种行之有效的方法。近年来,由于与天然细胞外基质的相似性,水凝胶成为最具吸引力的再生医学生物材料之一。但因其机械性能偏低极大地限制了其在各种动静脉血管及生物人工器官构建中的应用。本文设计了一组组合模具并用于单管道生物型人工血管的体外构建。具体构建过程如下:首先以海藻酸钠/纤维蛋白原为原材料,进行水凝胶配比实验,确定最佳浓度配比的海藻酸钠与纤维蛋白原复合水凝胶。然后与从7d的SD大鼠腹股沟脂肪组织中提取的脂肪干细胞复合,形成管状人工血管结构。最后采用静电纺丝技术,在管状载细胞水凝胶外复合一层PLGA高分子材料,增强管状载细胞水凝胶力学性能。在特有的铸型辅助下,对增强后的水凝胶血管结构、形态等各项性能进行了表征。结果表明,该血管结构表面呈半透明状且光滑,表面平整有弹性;扫描电镜下观察有均匀的孔隙结构,且内部孔间连通,孔径范围为170.78±8.91μm,为细胞生长提供了足够的生长空间;且本实验所用材料的溶胀率较低,其力学性能较好。生物学实验表明,力学增强后的血管移植物无细胞毒性,且溶血率较低,为1%,低于国际规定的5%的标准。这种采用静电纺丝增强后的含细胞水凝胶人工血管既具有生物学上的优势,即有利于内皮组织形成和稳定,又具有特殊的生理功能,即可与宿主体内血管网络相吻合,具备一定的抗缝合强度。既可作为生物型人工血管移植物,又可以成为复杂器官体外构建的模板。在再生医学、组织工程、生物材料、器官移植等几个热门领域都有着非常广阔的应用前景和不可替代的优势。
徐莹[9]（2019）在《虫草菌丝活性成分C02通过调控巨噬细胞影响肝星状细胞活化的抗肝纤维化机制研究》文中认为1.背景及目的:在我国,无论相对发病率还是绝对病例数,肝纤维化患者均居世界首位,其主要病因为:病毒性肝炎、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病、自身免疫性肝病或药物性肝病等,肝纤维化不仅是肝脏损伤的病理修复反应,还会进一步发展为肝硬化、肝癌、肝衰竭[1],是严重危害人民健康和消耗社会资源的难治性疾病。因此,抗肝纤维化是慢性肝病的重要治疗环节。西医学已有较多的临床试验报道,对于慢性病毒性（乙型、丙型）肝炎抗病毒治疗可有效逆转肝纤维化[2],但迄今临床上仍缺乏直接针对纤维结缔组织增生的有效治疗肝纤维化的生物或化学药物,而中药及其复方具有多组分、多途径与多环节的综合作用特点,近年来发现在抗肝纤维化治疗方面有明显优势,已经取得了较好的临床疗效,如扶正化瘀胶囊（片）、复方鳖甲软肝片等[3-5]。虫草菌丝作为中医药抗肝纤维化药物扶正化瘀胶囊/片中最重要的扶正药物,课题组前期大量研究证实以虫草菌丝为主药的扶正药物在促进肝纤维化逆转中发挥主要作用,为了解析其发挥抗肝纤维化作用的主要活性成分,课题组前期开展系列活性导向研究,并在近两年取得了可喜的进展,成功从虫草菌丝主要活性部位中分离并证实了一种脂溶性成分C02是虫草菌丝抗肝纤维化主要活性成分,课题组目前已经申请国家发明专利,但由于C02成分抗肝纤维化的作用机制仍不明确,制约了其进一步的新药开发与应用。因此本研究拟开展C02体内外抗肝纤维化研究,试图解析其抗肝纤维化机制,为其新药开发与应用提供参考。2.方法:（1）C02体内抗肝纤维化作用与机制研究:建立CCl4小鼠肝纤维化模型及DMN大鼠肝纤维化模型,给予C02干预治疗后,收集血清及肝组织。通过肝组织HE及天狼猩红胶原染色、羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）含量、血清肝功能指标、纤维化相关指标因子的免疫组化及蛋白、基因水平变化等检测,探讨虫草菌丝活性成分C02潜在抗纤维化的作用机制。（2）C02对肝星状细胞（HSCs）与巨噬细胞活化、增殖的影响:体外采用不同浓度的C02对激活的JS-1（小鼠肝星状细胞）进行干预,观察HSCs活化、增殖相关基因及蛋白的变化;采用不同浓度的C02对LPS激活的巨噬细胞（RAW264.7小鼠巨噬细胞）进行干预,检测巨噬细胞活化、增殖相关指标基因及蛋白的变化。（3）C02通过调控巨噬细胞表型抑制HSCs活化的研究:体外采用LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞活化模型,给予C02及STAT1抑制剂干预24 h,去药后与正常JS-1细胞共培养24 h,分别收取RAW264.7巨噬细胞及JS-1细胞,检测巨噬细胞及肝星状细胞活化、增殖相关指标基因及蛋白的变化。观察活化的巨噬细胞对肝星状细胞活化的影响以及C02的干预作用;3.结果:（1）C02对CCl4诱导肝纤维化小鼠的干预作用:C02对CCl4诱导的纤维化小鼠肝功能有明显的改善作用,C02中、高剂量组可有效降低血清谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）含量,且高剂量组药效优于低剂量组（P<0.05）;小鼠肝组织天狼猩红染色、胶原半定量及肝组织HE染色结果显示,C02高剂量组可有效减少胶原沉积及肝脏炎性细胞浸润,肝组织羟脯氨酸结果与胶原半定量结果基本一致（P<0.05）;免疫组化结果显示,C02用药组α-SMA、COL-I表达较模型组显着减少,且C02高剂量组药效优于低剂量组,荧光定量RT-PCR和Western-blot结果表达与免疫组化结果基本一致（P<0.01或P<0.05）。Western-blot蛋白免疫印迹结果显示,C02高剂量组p-ERK/ERK、PDGF、TNF-α蛋白水平较模型组显着下降（P<0.05）;较模型组相比,C02高剂量组M1型巨噬细胞表型相关蛋白STAT1及IRF5表达下调（P<0.05）;免疫组化结果显示,C02高剂量组小鼠M1型巨噬细胞标记物CD11b阳性表达较模型组明显减少,M2型巨噬细胞标记物CD206阳性表达较模型组有所增加。（2）C02对DMN诱导肝纤维化大鼠的干预作用:C02对DMN诱导的纤维化大鼠肝功能有改善作用,C02中、高剂量组可有效降低AST、ALT含量,且高剂量组药效优于低剂量组（P<0.05）;大鼠天狼猩红染色、胶原半定量及肝组织HE染色结果显示,C02高剂量组可有效减少胶原沉积及肝脏炎性细胞浸润,肝组织羟脯氨酸结果与胶原半定量结果基本一致（P<0.05）;免疫组化结果显示,C02用药组α-SMA、COL-I表达较模型组显着减少,且C02高剂量组药效优于低剂量组（P<0.05）,荧光定量PCR及Western-blot结果与免疫组化的结果表达基本一致。Western-blot结果显示,C02高剂量组p-ERK/ERK、PDGF、TNF-α蛋白水平较模型组显着下降（P<0.05）;较模型组相比,C02高剂量组M1型巨噬细胞表型相关蛋白STAT1及IRF5表达下调（P<0.05）;免疫组化结果显示,C02高剂量组大鼠M1型巨噬细胞标记物CD68阳性表达较模型组明显减少,M2型巨噬细胞标记物CD163阳性表达较模型组有所增加。（3）C02对肝星状细胞（HSCs）及巨噬细胞活化、增殖的影响:C02能够呈剂量依赖性的抑制小鼠肝星状细胞（JS-1）及原代肝星状细胞的增殖（P<0.05）;JS-1细胞经5 ng/m L TGF-β1处理激活造模,采取不同浓度C02干预,较模型组相比,40μM C02可显着降低JS-1细胞α-SMA和COL-I基因及蛋白的水平（P<0.05）;F-actin细胞染色结果显示,C02在20μM、40μM浓度时可成不同程度降低JS-1细胞F-actin的表达;原代小鼠肝星状细胞的油红染色实验结果显示,C02可显着增加原代肝星状细胞胞质内脂滴含量。RAW264.7巨噬细胞经100 ng/m L LPS处理激活造模,采取不同浓度C02干预,荧光定量PCR结果显示,较模型做相比,C02在10μM浓度时TGF-β1、IL-1、PDGF等相关炎性因子较模型组m RNA表达下降（P<0.01或P<0.05）;Elisa结果显示,5μM和10μM C02可在2 h-36 h内持续降低巨噬细胞分泌PDGF-BB的含量（P<0.05）,2.5μM、5μM和10μM C02可在8 h-36 h内持续降低巨噬细胞i NOS分泌量（P<0.05）;C02对巨噬细胞的起效浓度较对HSCs的起效浓度低2-16倍。（4）C02通过调控巨噬细胞表型抑制HSCs活化的研究:RAW264.7巨噬细胞与JS-1细胞共培养:LPS激活的RAW264.7巨噬细胞给予C02及STAT1抑制剂干预24h,去药后与JS-1细胞共培养24 h,模型组JS-1细胞α-SMA m RNA表达水平明显升高（P<0.05）,C02干预后,高剂量组α-SMA m RNA表达下调（P<0.05）,细胞爬片免疫荧光α-SMA检测也得到同样的结果;Western-blot蛋白免疫印迹结果显示,C02高剂量组可抑制JS-1细胞p-ERK/ERK的蛋白表达（P<0.01或P<0.05）。STAT1抑制剂组可抑制JS-1细胞α-SMA、COL-I m RNA的表达水平,STAT1抑制剂联合C02高剂量组药效优于STAT1或C02高剂量组单用组（P<0.05）;STAT1抑制剂及C02可抑制M1型巨噬细胞标志物CD11b及PDGF m RNA表达水平,且STAT1抑制剂联合C02高剂量组药效优于STAT1或C02高剂量组单用组（P<0.05）。4.结论:（1）体内药效学研究表明C02可有效改善CCl4小鼠肝纤维化模型及DMN大鼠肝纤维化模型的肝功能及纤维化程度,C02可以抑制M1型巨噬细胞及HSCs活化,同时发现C02在体内的作用机制与PDGF/ERK信号通路有关。（2）体外实验研究表明C02可能通过抑制STAT1进而抑制M1型巨噬细胞活化,从而减少PDGF-BB、TNF-α等因子释放,进而抑制HSCs的活化,其抑制HSCs活化的作用机制与PDGF/ERK信号通路有关。
杨靖[10]（2019）在《基于蛋白质组和近红外成像的晚期肝病靶向分子研究》文中认为肝硬化和肝癌是我国发病率和死亡率较高的两种肝病。目前,这两种肝病临床上均缺乏有效的治疗策略和靶向药物,主要原因为缺乏特异的靶向分子。为了鉴定肝硬化和肝癌特异的靶向分子,指导该肝病的临床治疗、改善患者预后,本研究通过结合高通量的蛋白质组学技术和高灵敏度的近红外二区成像技术建立起快速、高效的肝病靶向分子研究体系,并开展了肝硬化和肝癌靶向分子的鉴定及验证。本研究主要分为两部分:1、蛋白质组学结合近红外二区成像研究肝靶向分子研究体系的建立,并鉴定到肝癌特异的靶向分子MCM2:（1）MCM2在肝癌组织中显着上调。通过isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation（iTRAQ）定量蛋白质组分析肝癌和癌旁样本,并通过差异表达蛋白分析鉴定到MCM2在肝癌组织中显着上调。（2）通过组织芯片体外验证MCM2在肝癌组织中过表达。用MCM2抗体对100对肝癌和癌旁组织进行免疫组化染色,肝癌组织的阳性染色高达89.8%,而大部分癌旁组织的呈阴性染色,且MCM2在临床分期较高的肝癌组织中染色强度较高。（3）根据The Cancer Genome Atlas（TCGA）数据库中收录肝癌患者的癌和癌旁的RNAseq数据,MCM2的mRNA水平在肝癌组织中表达显着高于癌旁,与肝癌临床分期呈正相关,并且显着影响肝癌患者生存期。（4）近红外二区荧光活体成像显示MCM2靶向肝癌组织。用HepG2肝癌细胞系建立小鼠肝癌皮下肿瘤模型,近红外二区荧光探针偶联MCM2抗体尾静脉注射到模型小鼠体内,活体和离体结果均显示在肿瘤部位出现高亮度荧光,显示MCM2对肝癌组织具有较高的靶向性和选择性。（5）MCM2通过细胞周期蛋白影响肿瘤细胞周期和增殖。利用siRNA转染抑制MCM2表达,肝癌细胞的S期受到阻滞,细胞增殖显着下降,Lable-free定量蛋白质组研究提示MCM2可能通过细胞周期蛋白CDK2/7影响肝癌细胞系增殖。2、通过研究蛋白质组学聚焦肝硬化组织中细胞外基质Extracellular matrix（ECM）相关蛋白,发现肝硬化新的分子机制并鉴定肝硬化靶向分子CTSS:（1）CTSS在肝硬化组织中显着上调。通过iTRAQ定量蛋白质组学技术分析肝硬化肝组织和正常肝组织,鉴定到组织蛋白酶CTSS在肝硬化组织中上调表达,通过CTSS抗体进行免疫组化染色确认肝硬化组织中CTSS的表达显着高于正常肝组织,且在硬化程度较高的肝硬化组织中表达量较高。（2）根据美国国家生物技术中心（National Center for Biotechnology Information,NCBI）收录的肝硬化和正常肝组织RNAseq数据,CTSS在mRNA水平的表达量与肝硬化分期呈显着正相关。（3）近红外成像提示CTSS在肝硬化组织中表达量升高。使用C57Bl/6j野生型小鼠（wildtype,WT）建立CCl4诱导的肝硬化小鼠模型,合成荧光染料吲哚菁绿（Indocyanine Green,ICG）偶联CTSS抗体复合物ICG-CTSS,并注射到肝硬化模型小鼠和对照组小鼠体内,近红外成像显示在CCl4诱导的小鼠肝脏中出现显着的荧光累积,提示CTSS在肝硬化小鼠肝脏中的表达量升高。（4）CTSS影响肝硬化进展。利用WT鼠和相同遗传背景的CTSS基因敲除鼠（CTSS KO）建立CCl4诱导的肝硬化小鼠模型,根据苏木素伊红（Hematoxylin and eosin staining,HE）染色和Masson染色,CCl4诱导的CTSS KO鼠模型中,纤维间隔变细、胶原沉积减少,肝硬化缓解。因此,CTSS是肝硬化的潜在靶点。（5）通过蛋白质组鉴定CTSS酶切产物。进一步分析肝硬化差异表达蛋白,发现从胶原蛋白上降解的一系列活性肽段,以Endostatin和Canstatin为代表的内源性血管抑制素家族蛋白在肝硬化组织中显着上调。并且Western blot显示,Endostatin在CCl4诱导的CTSS KO组小鼠中的表达量明显低于WT组小鼠,提示Endostatin可能是CTSS的酶切产物。（6）CTSS可能通过影响血管抑制素蛋白Endostatin使LSEC失窗孔进而加重肝硬化。LSEC血管化即失窗孔,是肝硬化早期的重要病理改变。通过扫描电镜,CCl4诱导的WT小鼠组织中LSEC细胞开放的窗孔显着下降,而CTSS KO后LSEC细胞窗孔能维持开放。并在细胞水平证实重组的Endostatin可抑制LSEC细胞窗孔开放。揭示CTSS通过血管抑制素蛋白Endostatin抑制LSEC细胞窗孔开放而影响肝硬化的潜在分子机制。
二、肝组织器官工程血管化的研究进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肝组织器官工程血管化的研究进展（论文提纲范文）
（1）基于肝窦内皮细胞微尺度生物力学性质研究芪术颗粒抗肝纤维化机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 中医药学治疗肝纤维化的研究进展 |
| 综述二 现代医学对肝纤维化的研究进展 |
| 综述三 益气活血法对肝窦内皮细胞细胞生物学影响的研究 |
| 参考文献 |
| 第二部分 基于益气活血法治疗肝纤维化临床疗效的Meta分析 |
| 前言 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 芪术颗粒对肝纤维化模型大鼠的影响研究 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 结论 |
| 实验二 大鼠肝窦内皮细胞的原代分离与提取 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验三 芪术颗粒含药血清对肝窦内皮细胞胞内一氧化氮合成酶、一氧化氮的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 结论 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四 芪术颗粒含药血清对肝窦内皮细胞微尺度生物力学性质影响的研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 小结 |
| 结论 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 创新性 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
| 中医药科技查新报告书 |
（2）基于3D生物打印技术构建肝脏相关体外模型（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一部分: 基于3D生物打印技术构建肝脏组织及其功能验证 |
| 1. 前言 |
| 2. 实验材料 |
| 3. 实验方法 |
| 4. 实验结果 |
| 4.1 3D生物打印肝组织 |
| 4.2 3D生物打印肝组织的体外功能验证 |
| 4.3 3D生物打印肝组织挽救肝衰小鼠 |
| 4.4 3D生物打印肝组织体内功能验证 |
| 5. 讨论 |
| 6. 结论 |
| 第二部分: 3D生物打印肝癌模型在抗肿瘤药物筛选中的应用价值 |
| 1. 前言 |
| 2. 实验材料 |
| 3. 实验方法 |
| 4. 实验结果 |
| 4.1 3D生物打印肝癌模型的构建 |
| 4.2 3D生物打印肝癌模型生物学特征 |
| 4.3 3D生物打印肝癌模型表达谱特征 |
| 4.4 3D生物打印肝癌模型药物平台功能验证 |
| 5. 讨论 |
| 6. 结论 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词 |
| 综述 3D生物打印在肝脏疾病中的应用及关键问题的研究进展 |
| 参考文献 |
| 发表文章情况 |
| 致谢 |
（3）LECT2/Tie1信号调控肝纤维化进程的作用和机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 第一章 LECT2在纤维化肝脏中高表达 |
| 一、实验结果 |
| 二、结论 |
| 三、讨论 |
| 第二章 LECT2主要表达于肝细胞和血管内皮细胞 |
| 一、结果 |
| 二、结论 |
| 三、讨论 |
| 第三章 敲除Lect2可以缓解肝脏纤维化 |
| 一、结果 |
| 二、结论 |
| 三、讨论 |
| 第四章 LECT2调控血管内皮细胞功能 |
| 一、结果 |
| 二、结论 |
| 三、讨论 |
| 第五章 LECT2与Tie1相互作用的关键位点 |
| 一、结果 |
| 二、结论 |
| 三、讨论 |
| 第六章 LECT2依赖与Tie1结合发挥作用 |
| 一、结果 |
| 二、结论 |
| 三、讨论 |
| 第七章 LECT2/Tie1下游信号通路研究 |
| 一、结果 |
| 二、结论 |
| 三、讨论 |
| 全文讨论 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间成果 |
| 致谢 |
（4）3D生物打印在组织工程应用中的技术难题和前景展望（论文提纲范文）
| 1 3D打印技术介绍 |
| 2 3D生物打印技术在组织工程中的应用 |
| 2.1 类似骨组织植入物 |
| 2.2 皮肤 |
| 2.3 心脏瓣膜 |
| 2.4 神经 |
| 2.5 肝脏 |
| 2.6 肺泡 |
| 2.7 卵巢 |
| 2.8 角膜（基质） |
| 3 3D生物打印在组织工程中面临的技术难题和挑战 |
| 3.1 组织异质性 |
| 3.2 血管化难题 |
| 3.3 组织和器官排斥 |
| 3.4 缺乏理想的生物墨水 |
| 3.4.1 活体细胞 |
| 3.4.2 聚合物 |
| 3.5 仿生效果不佳 |
| 3.6 缺乏合理及标准化的构建策略 |
| 3.7 打印出的移植组织不能适应婴幼儿患者身体生长的要求 |
| 4 3D生物打印技术在组织工程中的前沿研究及展望 |
| 5 结语 |
（5）基于肝窦毛细血管化探讨抗纤软肝颗粒抗肝纤维化的临床疗效与作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表(Abbreviations) |
| 前言 |
| 第一部分 :抗纤软肝颗粒治疗慢性乙型肝炎(CHB)肝纤维化痰瘀互结型临床回顾性对照研究 |
| 1 临床资料 |
| 2 研究方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 :基于网络药理学探讨抗纤软肝颗粒抗肝纤维化药理作用机制 |
| 1 实验方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第三部分 基于肝窦毛细血管化探讨抗纤软肝颗粒抗肝纤维化作用机制实验研究 |
| 实验一 :基于肝窦毛细血管化探讨抗纤软肝颗粒抗肝纤维化作用机制的细胞实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 实验二 :基于肝窦毛细血管化探讨抗纤软肝颗粒抗肝纤维化作用机制的动物实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附件一:攻读学位期间的研究成果 |
| 附件二:综述 肝纤维化中西医诊断与防治最新研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（6）基于微流控芯片的声流体混合器及类肝组织模型构建与分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 第一章 微流控技术溶液混合与器官芯片研究进展 |
| 1.1 微流控溶液混合研究进展 |
| 1.1.1 微流控混合技术分类 |
| 1.1.2 微流控混合研究应用 |
| 1.2 器官芯片研究进展 |
| 1.2.1 器官芯片技术分类 |
| 1.2.2 器官芯片研究应用 |
| 1.3 总结与展望 |
| 1.4 本研究的目的与意义 |
| 试验研究 |
| 第一篇 基于声波的快速稳定原位混合及其应用 |
| 第二章 声流体快速稳定原位混合器构建 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 试验材料 |
| 2.1.2 试验方法 |
| 2.2 结果与讨论 |
| 2.2.1 芯片设计与原理 |
| 2.2.2 混合效果优化 |
| 2.2.3 混合时间计算 |
| 2.2.4 混合稳定性测试 |
| 2.2.5 两种物质混合试验 |
| 2.2.6 荧光素猝灭试验 |
| 2.2.7 升级型声流体装置 |
| 2.3 小结 |
| 第三章 基于声流体混合器的酶促反应常数测定 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.2 试验方法 |
| 3.2 结果与讨论 |
| 3.2.1 酶常数研究 |
| 3.2.2 反应产物标定 |
| 3.2.3 酶促反应产物浓度测定 |
| 3.2.4 管道中酶促反应模型校正 |
| 3.2.5 酶促反应常数测定 |
| 3.3 小结 |
| 第二篇 基于微流控芯片的类肝组织模型构建及分析 |
| 第四章 集成式微流控芯片构建 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 试验方法 |
| 4.2 结果与讨论 |
| 4.2.1 芯片设计与原理 |
| 4.2.2 气动控制阀门展示 |
| 4.2.3 气动控制阀门操作 |
| 4.2.4 气动控制阀门工作压力选择 |
| 4.3 小结 |
| 第五章 类肝组织模型构建及分析 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 试验材料 |
| 5.1.2 试验方法 |
| 5.2 结果与讨论 |
| 5.2.1 类肝组织结构单元制备 |
| 5.2.2 类肝组织单元培养与活力鉴定 |
| 5.2.3 类肝组织单元三维观察 |
| 5.2.4 类肝组织单元细胞骨架与紧密连接表征 |
| 5.2.5 类肝组织单元肝细胞极化表征 |
| 5.2.6 类肝组织单元胆小管表征 |
| 5.2.7 类肝组织单元的立体堆叠与类肝组织块构建 |
| 5.2.8 类肝组织块表征 |
| 5.3 小结 |
| 第六章 研究结论 |
| 本研究的创新点 |
| 参考文献 |
| 缩略词 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）肝衰竭修复替代治疗的现状与发展对策（论文提纲范文）
| 文章快速阅读： |
| 文题释义： |
| 0引言Introduction |
| 1 资料和方法Data and methods |
| 1.1 资料来源 |
| 1.3 数据提取 |
| 1.4 质量评价 |
| 2 结果Results |
| 2.1 人工肝 |
| 2.1.1 非生物型人工肝 |
| 2.1.2生物型人工肝 |
| 2.1.3 混合型人工肝 |
| 2.2 组织工程肝脏 |
| 2.2.1 生物材料的优化 |
| 2.2.2生物支架的抗凝 |
| 2.2.3 组织工程肝脏构建的关键技术 |
| 2.3 异种器官移植 |
| 3 展望Prospects |
（8）基于组合模具法及静电纺丝技术的人工血管材料的基础研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分 绪论 |
| 1 前言 |
| 1.1 生物型人工血管的研究现状 |
| 1.2 生物医用水凝胶的研究现状 |
| 1.3 组合模具的研究现状 |
| 1.4 静电纺丝技术的研究现状 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要实验试剂 |
| 2.2 主要实验仪器 |
| 2.3 本课题的研究方法及目标 |
| 2.4 统计学分析方法 |
| 第二部分 纤维蛋白-海藻酸钠水凝胶的制备 |
| 1 引言 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 海藻酸钠/纤维蛋白原水凝胶的制备 |
| 2.2 扫描电镜(SEM)观察孔隙 |
| 2.3 机械性能测量 |
| 2.4 不同浓度海藻酸钠与不同浓度氯化钙对溶胀率的影响 |
| 2.5 生物相容性 |
| 3 实验结果 |
| 4 本章小结 |
| 第三部分 种子细胞的制备 |
| 1 引言 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 脂肪干细胞的提取 |
| 2.2 脂肪干细胞的多向诱导 |
| 3 实验结果 |
| 4 本章小结 |
| 第四部分 组合模具法结合静电纺丝技术体外构建人工血管组织过程研究 |
| 1 引言 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 组合模具法构建人工血管 |
| 2.2 人工血管模具的构建 |
| 2.3 静电纺丝方法的制备 |
| 3 实验结果 |
| 4 本章小结 |
| 第五部分 血管材料生物相容性研究 |
| 1 引言 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 溶血实验 |
| 2.2 活死鉴定 |
| 2.3 免疫荧光检测 |
| 2.4 蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测相关蛋白的表达 |
| 3 实验结果 |
| 4 本章小结 |
| 第六部分 总结与展望 |
| 1 总结 |
| 2 展望 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（9）虫草菌丝活性成分C02通过调控巨噬细胞影响肝星状细胞活化的抗肝纤维化机制研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一章 C02对CCl_4诱导肝纤维化小鼠的干预作用研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 动物来源 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要溶液配制 |
| 1.4 主要仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 动物模型制备方法 |
| 2.2 血清肝功能检测 |
| 2.3 蛋白免疫印迹 |
| 2.4 肝组织HE染色 |
| 2.5 肝组织天狼猩红染色及胶原半定量 |
| 2.6 肝组织羟脯氨酸含量 |
| 2.7 肝组织和细胞总RNA抽提 |
| 2.8 Real time PCR |
| 2.9 免疫组织化学染色 |
| 2.10 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组小鼠基本情况 |
| 3.2 小鼠体重、肝重、脾重、肝体比及脾体比的变化情况 |
| 3.3 C02对CCl_4 肝纤维化小鼠血清ALT、AST的影响 |
| 3.4 C02对CCl_4肝纤维化小鼠肝组织病理学及羟脯氨酸含量的影响 |
| 3.5 C02对CCl_4 肝纤维化小鼠肝脏α-SMA、COL-I表达的影响 |
| 3.6 C02对CCl_4诱导肝纤维化小鼠肝内巨噬细胞表型的影响 |
| 3.7 C02 对促纤维化相关因子PDGF-BB、TNF-α表达的影响 |
| 3.8 C02对JNK/ERK/P38 信号通路的影响 |
| 3.9 C02 对巨噬细胞活化相关蛋白IRF5、STAT1 的影响 |
| 4 本章小结 |
| 第二章 C02对DMN诱导肝纤维化大鼠的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 动物来源 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要溶液配制 |
| 1.4 主要仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 动物模型制备方法 |
| 2.2 血清肝功能检测 |
| 2.3 蛋白免疫印迹 |
| 2.4 肝组织HE染色 |
| 2.5 肝组织羟脯氨酸含量 |
| 2.6 肝组织和细胞总RNA抽提 |
| 2.7 Real time PCR |
| 2.8 免疫组织化学染色 |
| 2.9 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组大鼠基本情况 |
| 3.2 大鼠体重、肝重、脾重、肝体比及脾体比的变化情况 |
| 3.3 C02对DMN肝纤维化大鼠血清ALT、AST含量的影响 |
| 3.4 C02对DMN纤维化大鼠肝组织病理及羟脯氨酸含量的影响 |
| 3.5 C02对DMN肝纤维化大鼠肝脏α-SMA、COL-I表达的影响 |
| 3.6 C02对DMN诱导肝纤维化大鼠肝内巨噬细胞表型的调控作用 |
| 3.7 C02对DMN诱导肝纤维化大鼠肝脏促纤维化因子PDGF-BB、TNF-α表达的影响 |
| 3.8 C02对DMN诱导肝纤维化大鼠肝脏JNK/ERK/P38 信号通路的影响 |
| 3.9 C02对巨噬细胞活化相关蛋白的影响 |
| 4 本章小结 |
| 第三章 C02对肝星状细胞及巨噬细胞的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞株 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要溶液配制 |
| 1.4 主要仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 分离原代小鼠肝星状细胞 |
| 2.3 原代肝星状细胞存活率鉴定 |
| 2.4 原代肝星状细胞的纯度鉴定 |
| 2.5 细胞免疫荧光检测 |
| 2.6 CCK8法检测细胞增殖 |
| 2.7 Real Time PCR |
| 2.8 蛋白免疫印迹 |
| 2.9 ELISA检测 |
| 2.10 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 C02对JS-1细胞活力及增殖的影响 |
| 3.2 C02对JS-1 细胞α-SMA、COL-I表达的影响 |
| 3.3 C02 对小鼠原代肝星状细胞α-SMA、COL-I表达的影响 |
| 3.4 C02对巨噬细胞的增殖及活力的影响 |
| 3.5 C02 对巨噬细胞分泌相关炎性因子PDGF-BB、TNF-α、TGF-β1、IL-1 mRNA的影响 |
| 3.6 C02 对巨噬细胞分泌PDGF-BB、TNF-α、iNOS的影响 |
| 4 本章小结 |
| 第四章 C02通过巨噬细胞影响肝星状细胞的活化 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞株 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要溶液配制 |
| 1.4 主要仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 Transwell细胞共培养 |
| 2.3 细胞免疫荧光检测 |
| 2.4 CCK8法检测细胞增殖 |
| 2.5 Real Time PCR |
| 2.6 蛋白免疫印迹 |
| 2.7 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 共培养不同时间点巨噬细胞对肝星状细胞的活化影响 |
| 3.2 共培养24h巨噬细胞CD11b、CD206 表达变化 |
| 3.3 共培养24h巨噬细胞PDGF-BB、TNF-α、TGF-β1、IL-1 mRNA的变化 |
| 3.4 共培养24h培养上清中PDGF-BB、TNF-α蛋白含量变化 |
| 3.5 共培养24h巨噬细胞IRF-5、STAT1 mRNA表达变化 |
| 3.6 共培养24h巨噬细胞对肝星状细胞的活化影响 |
| 3.7 共培养24h对 JS-1 细胞ERK、P-ERK的影响 |
| 3.8 STAT1 抑制剂及C02 干预后巨噬细胞STAT1 mRNA变化情况 |
| 3.9 STAT1 抑制剂及C02 干预后巨噬细胞CD11b、CD206 mRNA的表达变化 |
| 3.10 STAT1 抑制剂及C02 干预后巨噬细胞分泌促炎因子PDGF-BB、TNF-α变化情况 |
| 3.11 STAT1抑制剂干预后肝星状细胞的活化情况 |
| 4 本章小结 |
| 讨论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 本文的创新点 |
| 附录1 :文献综述 肝脏微环境中各种细胞对肝星状细胞活化的影响 |
| 参考文献 |
| 附录2:在校期间发表的学术论文 |
（10）基于蛋白质组和近红外成像的晚期肝病靶向分子研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 晚期肝病临床治疗形势严峻 |
| 1.1.1 肝病发展历程 |
| 1.1.2 肝硬化临床治疗现状 |
| 1.1.3 肝硬化病理机制复杂 |
| 1.1.4 缺乏特异的肝硬化靶向分子 |
| 1.1.5 肝癌临床治疗面临挑战 |
| 1.1.6 恶性细胞增殖是肝癌的重要发病机制 |
| 1.1.7 缺乏有效的肝癌靶向分子 |
| 1.2 基于蛋白质组学的晚期肝病靶向分子研究进展 |
| 1.3 近红外成像为体内靶向研究提供有效手段 |
| 1.4 蛋白质组结合近红外成像鉴定晚期肝病靶向分子 |
| 1.5 拟解决科学问题及研究策略 |
| 2 蛋白质组结合近红外成像研究肝癌靶向分子体系的建立 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 肝癌患者样本 |
| 2.1.2 实验动物及细胞系 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 主要试剂 |
| 2.1.5 主要溶液配制 |
| 2.2 实验步骤 |
| 2.2.1 肝癌差异蛋白数据分析 |
| 2.2.2 免疫组化染色 |
| 2.2.3 SiRNA细胞转染 |
| 2.2.4 Real-time PCR检测 |
| 2.2.5 Western blot检测 |
| 2.2.6 细胞周期检测 |
| 2.2.7 细胞增殖检测 |
| 2.2.8 核蛋白提取 |
| 2.2.9 核蛋白Lable-free定量分析 |
| 2.2.10 核蛋白差异蛋白分析 |
| 2.2.11 建立肝癌小鼠皮下肿瘤造模 |
| 2.2.12 探针合成 |
| 2.2.13 探针稳定性及信噪比评价 |
| 2.2.14 肝癌小鼠模型近红外成像 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 蛋白质组筛选肝癌差异表达蛋白 |
| 2.3.2 组织水平验证差异表达蛋白MCM2 |
| 2.3.3 TCGA数据库验证肝癌组织中MCM2 表达 |
| 2.3.4 近红外成像研究MCM2 活体肿瘤靶向性 |
| 2.3.5 MCM2 影响肿瘤细胞周期和细胞增殖 |
| 2.3.6 定量蛋白质组研究MCM2 影响肿瘤生长潜在机制 |
| 2.4 本章小结 |
| 3 基于蛋白质组和近红外成像的肝硬化靶向分子研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 肝硬化患者样本 |
| 3.1.2 实验动物 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.1.4 主要试剂 |
| 3.1.5 主要溶液配制 |
| 3.2 实验步骤 |
| 3.2.1 肝硬化组织蛋白提取 |
| 3.2.2 iTRAQ定量蛋白质组标记 |
| 3.2.3 差异蛋白分析 |
| 3.2.4 N端标记 |
| 3.2.5 免疫组化染色 |
| 3.2.6 免疫荧光染色 |
| 3.2.7 建立CCl_4 诱导肝硬化小鼠模型 |
| 3.2.8 HE染色 |
| 3.2.9 Masson染色 |
| 3.2.10 羟脯氨酸含量检测 |
| 3.2.11 肝硬化小鼠模型近红外成像 |
| 3.2.12 小鼠肝组织电镜样本制作 |
| 3.2.13 Western blot |
| 3.2.14 LSEC细胞分选及检测 |
| 3.2.15 Endostar处理LSEC细胞 |
| 3.2.16 其他实验 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 蛋白质组筛选肝硬化差异表达蛋白 |
| 3.3.2 组织水平验证差异表达蛋白CTSS |
| 3.3.3 NCBI数据验证肝硬化组织中CTSS表达 |
| 3.3.4 CTSS活体成像具有临床诊断价值 |
| 3.3.5 CTSS影响肝硬化进程 |
| 3.3.6 蛋白质组筛选CTSS酶切产物血管抑制素蛋白 |
| 3.3.7 CTSS可通过血管抑制素蛋白Endostatin抑制LSEC窗孔开放 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 总结与展望 |
| 4.1 主要结论 |
| 4.2 研究展望 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 附表 |
| 攻博期间科研成果目录 |
| 致谢 |
四、肝组织器官工程血管化的研究进展（论文参考文献）
- [1]基于肝窦内皮细胞微尺度生物力学性质研究芪术颗粒抗肝纤维化机制[D]. 张强. 中国中医科学院, 2021(02)
- [2]基于3D生物打印技术构建肝脏相关体外模型[D]. 孙乐家. 北京协和医学院, 2021(02)
- [3]LECT2/Tie1信号调控肝纤维化进程的作用和机制研究[D]. 徐蒙. 南方医科大学, 2021
- [4]3D生物打印在组织工程应用中的技术难题和前景展望[J]. 吴崇,冷雪辉. 山西科技, 2020(04)
- [5]基于肝窦毛细血管化探讨抗纤软肝颗粒抗肝纤维化的临床疗效与作用机制[D]. 许杰. 湖北中医药大学, 2020(08)
- [6]基于微流控芯片的声流体混合器及类肝组织模型构建与分析[D]. 田畅. 西北农林科技大学, 2020(02)
- [7]肝衰竭修复替代治疗的现状与发展对策[J]. 郭伟,卢姗,范红,李君. 中国组织工程研究, 2020(20)
- [8]基于组合模具法及静电纺丝技术的人工血管材料的基础研究[D]. 刘辰. 中国医科大学, 2020(01)
- [9]虫草菌丝活性成分C02通过调控巨噬细胞影响肝星状细胞活化的抗肝纤维化机制研究[D]. 徐莹. 上海中医药大学, 2019(03)
- [10]基于蛋白质组和近红外成像的晚期肝病靶向分子研究[D]. 杨靖. 武汉大学, 2019(06)