一、林蛙油对衰老模型小鼠部分生理指标的影响（论文文献综述）
张怡[1]（2021）在《哈蟆油蛋白质组学分析及多肽的制备工艺与生物活性的初步研究》文中研究说明目的:通过TMT定量技术对东北林蛙（Rana dybowskii Guenther）和黑龙江林蛙（Rana amurensis Boulenger）的输卵管进行定量蛋白组学研究,利用生物信息学对筛选出的差异蛋白的功能进行分析,研究其参与的生物学过程及代谢通路等。采用响应面法优化哈蟆油提取工艺,复合酶解法制备哈蟆油多肽,验证其抗氧化活性,通过体外实验对哈蟆油蛋白酶解物的生物活性进行初步研究,提高哈蟆油的生物利用度并为哈蟆油的开发提供新依据。方法:（1）利用TMT蛋白定量分析技术,鉴定东北林蛙和黑龙江林蛙输卵管的差异蛋白质,并对其进行富集分析利用GO富集和KEGG通路分析生物信息学分析,从富集程度较强的通路中筛选出差异表达基因,分析两种林蛙的差异性并为后续实验的输卵管的原材料选择提供依据。（2）以蛋白质浓度作为考察指标,通过单因素考察结果设计响应面实验优化哈蟆油（东北林蛙输卵管）的最佳提取工艺,采用酶解法制备哈蟆油酶解多肽（ORPH）,以考马斯亮蓝法测定ORPH的蛋白质含量,SDS-PAGE凝胶电泳检测ORPH的蛋白分布对酶解工艺进行筛选。（3）通过检测ORPH对羟基自由基和DPPH自由基的清除作用,验证其抗氧化能力。通过CCK-8法检测ORPH对不同细胞系的影响。利用乙醇损伤L-02肝细胞,CCK-8法筛选乙醇的损伤作用浓度及处理时间,并检测ORPH对乙醇诱导的L-02肝细胞损伤的影响。采用流式细胞术检测给药ORPH前后细胞凋亡和细胞周期变化,Hoechst染色检测细胞凋亡,JC-1染色检测线粒体膜电位,通过流式细胞仪检测活性氧ROS生成量的变化;Western blot法检测凋亡蛋白Caspas-3、Bcl2/Bax、CytC、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路JNK、p38蛋白及细胞焦亡相关蛋白在L-02肝细胞中的表达变化。结果:（1）通过鉴定发现了蛋白质4919.0个,蛋白质中涵盖了定量信息的有4549.0个。若差异表达变化以2倍作为HLvs DL的标准变化阈值,其中上调的蛋白数量是509,下调519。KEGG通路结果较为集中的通路主要包括:丙酮酸代谢、糖酵解、碳代谢等,糖酵解通路中鉴定到ALDH2基因发生下调,在东北林蛙中高表达。（2）通过响应面软件分析,最终得到哈蟆油最佳提取工艺为液料比1:140,时间14 h,pH值为4.5,蛋白得率为51.30%。通过评价酶解后蛋白分布和蛋白质含量变化确定了ORPH制备的最佳酶解条件为胃蛋白酶和碱性蛋白酶复合法制备,SDS-PAGE电泳检测不同酶解方法的蛋白分子量分布,复合酶解法制备的ORPH分子量主要集中在35 kD以下,分子量明显减小,且蛋白质含量未降低,蛋白酶解效果良好;（3）对ORPH进行抗氧化性检测,结果显示,ORPH的羟基自由基清除率和DPPH清除率达到30%-40%,均高于未酶解的哈蟆油。CCK-8法检测ORPH对细胞无毒性作用;400 m M乙醇可在12 h内明显引起L-02肝细胞损伤（p<0.001）,成功建立酒精性肝细胞损伤模型;与模型组比较,加入ORPH处理L-02肝细胞24 h后,细胞存活率扩大、细胞周期的阻滞有所改善、细胞凋亡率下降,线粒体膜电位升高、ROS的生成量减少。模型组的Bax、CytC、Casepase-3凋亡相关蛋白的表达明显升高,MAPK信号通路相关蛋白JNK、p38上调（p<0.05）,且焦亡相关蛋白Caspas-1、GSDMD及IL-1β表达明显增强,Bcl-2显着下降（p<0.01）;与模型组相比,加入ORPH处理后的Bax、CytC、Casepase-3蛋白表达明显降低（p<0.01）,Bcl-2蛋白表达升高（p<0.01）,MAPK信号通路相关蛋白及焦亡相关蛋白表达均呈下降趋势（p<0.01）。结论:结合TMT定量技术和生物信息学分析了黑龙江林蛙与东北林蛙的差异蛋白,筛选出糖酵解通路中的AKDH2基因在东北林蛙中高表达,为后续实验的原材料选择和生物活性代谢通路研究提高了基础。采用响应面法对哈蟆油的提取工艺进行优化,复合酶解法提取制备哈蟆油多肽并验证其抗氧化活性;通过体外活性实验研究,结果显示ORPH可通过抑制乙醇诱导L-02肝细胞引起的氧化应激肝细胞损伤,改善恢复线粒体膜电位,降低线粒体介导的细胞凋亡通路蛋白的表达,并抑制MAPK信号通路相关蛋白、焦亡通路相关蛋白表达,从而降低乙醇诱导L-02肝细胞的线粒体功能障碍及炎症反应并减轻氧化应激,对酒精性肝损伤起到治疗作用。
龙文敏[2]（2020）在《食品胶对林蛙油凝胶特性的影响及其产品创制》文中研究指明林蛙油是雌性林蛙输卵管的干制品,又称哈士蟆油、蛤蟆油、雪蛤油,号称“绿色软黄金”,含有丰富的蛋白质、矿质元素、脂肪酸等活性成分,具有增强免疫、抗疲劳、抗衰老等多种保健功能,是传统名贵滋补品。目前市面上的林蛙油大多以干品形式为主,深加工产品极少。林蛙油可吸水膨胀形成凝胶,但凝胶强度较低,且腥味较重,严重影响其产品食用品质。因此本研究通过向林蛙油中添加多糖类食品胶,以期改善林蛙油凝胶的凝胶特性,并通过配方优化,开发一款美味可口的林蛙油凝胶态产品,这对林蛙油的精深加工提供有益参考。本文研究了黄原胶、魔芋胶、黄原胶-魔芋胶复配比、复配胶（黄原胶-魔芋胶）添加量对林蛙油凝胶特性的影响,以及菠萝香精添加量、复合甜味剂添加量、复配胶添加量对林蛙油凝胶感官评分及质构的影响,并在此基础上开发一款林蛙油凝胶态产品。主要研究内容及结论如下:（1）食品胶对林蛙油凝胶流变特性的影响静态流变学测试的结果表明,食品胶的加入会增大食品胶-林蛙油复合凝胶体系的黏度,复合体系具有典型的剪切稀化现象。温度扫描测试结果显示,食品胶-林蛙油复合凝胶体系受温度影响较大,G′、G″和tanδ值随着温度的升高而降低。动态黏弹性测试结果显示,食品胶-林蛙油复合凝胶均呈现出弱凝胶性质,具有频率依赖性。其中黄原胶、复配胶的加入提高了凝胶体系的G′值,魔芋胶的加入会降低体系的G′值。当黄原胶-魔芋胶复配比为1:1时,林蛙油凝胶的流变学特性最佳。（2）食品胶对林蛙油凝胶质构特性的影响黄原胶、复配胶的加入能够改善林蛙油凝胶的质构特性;魔芋胶的加入会降低林蛙油凝胶的硬度、弹性、内聚性、咀嚼性,不利于林蛙油凝胶结构的维持;当黄原胶、魔芋胶质量比为1:1时,林蛙油凝胶的硬度、弹性、咀嚼性最高,质构特性最佳。黄原胶、复配胶的加入能提高林蛙油凝胶的持水力,魔芋胶的加入明显降低林蛙油凝胶的持水力。扫描电镜结果显示,黄原胶的加入有利于保持林蛙油凝胶的网状结构,而魔芋胶的加入会使林蛙油凝胶的微孔孔径变大,不利于林蛙油凝胶网络的稳定;复配胶的加入能够使林蛙油凝胶形成更加致密的网络结构。（3）林蛙油凝胶态食品的研发以感官评分和质构测定结果为指标,通过单因素试验及正交试验,并结合模糊数学感官评价法确定了林蛙油凝胶态食品的最优配方为:菠萝香精添加量0.3%、复合甜味剂添加量0.09%、复配胶添加量0.4%。各因素对林蛙油凝胶态产品感官评分影响的大小顺序为:复合甜味剂添加量>复配胶添加量>菠萝香精添加量。
石红岭[3]（2020）在《林蛙油免疫活性肽的制备及体外活性研究》文中提出林蛙油为蛙之精华,是我国传统的滋补佳品,营养价值丰富,具有促进发育、延缓衰老、补肾益精、养阴润肺、美容养颜、强身健体等诸多功效。目前,人们食用林蛙油主要以浸泡、蒸煮等方法,传统的食用方法虽然最大程度的保留了原料的营养成分,但其在人体内并不能被充分的吸收利用,造成林蛙资源的极大浪费。本研究以脱脂林蛙油为原料,通过酶解、超滤和凝胶色谱分离纯化得到林蛙油活性肽,并对制备的高活性肽进行结构鉴定和体外免疫活性研究,为开发林蛙油免疫活性肽功能性食品,进一步提高林蛙油的利用价值,提供理论依据和技术支持。主要研究结果如下:（1）采用中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶及风味蛋白酶等五种蛋白酶对脱脂、泡发过的林蛙油进行酶解,以林蛙油蛋白酶解液中氨基氮含量为指标,综合考虑生产成本等相关问题,最终筛选制备林蛙油酶解液的最佳蛋白酶为中性蛋白酶。分别考察酶解时间、酶解温度、pH值、加酶量等4个因素对林蛙油蛋白水解效果的影响,利用L9（34）正交试验对林蛙油蛋白酶解条件进行优化。正交试验结果表明,以中性蛋白酶制备林蛙油蛋白酶解液的最佳工艺参数:酶解时间为5 h,酶解温度为55℃,pH值为7.0,加酶量为5000 U/g。（2）Sephadex G-25凝胶色谱分离林蛙油活性肽得到三个组分（F1、F2、F3）,这三个组分对小鼠脾细胞和RAW264.7细胞免疫调节作用的影响:F1、F2和F3均能诱导小鼠脾细胞和RAW264.7细胞增殖,提高RAW264.7细胞的吞噬活性,其中F2作用效果较佳。F2浓度为320μg/mL时,可将RAW264.7细胞的增殖率提高26.5%,在LPS协同下,将其吞噬活性提高58.5%;可在ConA协同下,将小鼠脾细胞的增殖率提高51.9%。（3）以高效液相串联质谱系统对高免疫活性组分F2进行结构鉴定,得到3条林蛙油免疫活性肽,其氨基酸序列分别为AAGFLMK、SDLEWIR、HYDQSYR。（4）高免疫活性组分F2具有缓解CTX免疫抑制,促进小鼠脾细胞和RAW264.7细胞增殖,提高RAW264.7细胞上清液中细胞因子IL-1β和TNF-α浓度,提高NO浓度的作用。
郭宪一,范红艳[4]（2020）在《林蛙油的药理作用研究进展》文中指出林蛙油的药理作用主要包括抗氧化和抗衰老作用,提高机体免疫力作用,抗疲劳作用,对辐射损伤的保护作用,对肝纤维化损伤的修复作用,预防骨质疏松作用和对哮喘小鼠肺细胞的保护作用等。
张悦[5]（2020）在《东北林蛙油中孕激素及其合成相关因子表达研究》文中提出东北林蛙是我国一种珍稀的经济动物,雌性的输卵管会在冬眠期之前（每年的10月份）发生特异性的膨大,经历晾晒后形成林蛙油。林蛙油中作为一种功能食品,其中富含性类固醇激素成分,具有调节人体内分泌的功能。然而,林蛙油自身是否能够合成性类固醇激素迄今为止尚不清楚。本项研究以林蛙油—东北林蛙在冬眠前期的输卵管作为主要研究的对象,以繁殖期的输卵管为对照,检测两个时期的林蛙输卵管中胆固醇、孕激素以及孕激素合成相关因子的表达水平,为阐明林蛙油自身合成孕激素以及性类固醇激素在林蛙输卵管中的合成途径提供重要的科学理论依据。同时,该项研究结果也为今后可持续的深度开发林蛙油功能性食品奠定了一定的基础。本项目首先通过采用组织学的方法,观察冬眠前期和繁殖期的输卵管在组织形态方面的改变;通过无参转录组实验,检测两个时期的东北林蛙输卵管中差异基因富集情况;采用酶组织法,检测两个时期的东北林蛙输卵管中,性类固醇激素前体—胆固醇的含量;通过酶联免疫吸附实验,测定两个时期的东北林蛙输卵管中孕激素的含量;通过免疫组化实验、免疫印迹实验和Real Time PCR（RT-PCR）实验,研究了两个时期的东北林蛙输卵管中参与胆固醇转运的蛋白（St AR）、参与合成孕激素的反应的限速酶（P450scc）、调控类固醇激素合成的转录因子（SF-1）,参与合成胆固醇的反应的限速酶（HMGCR）以及参与低密度脂蛋白摄取的受体（LDLR）的表达情况。本研究的主要成果如下所述:（1）组织学的结果表明,与繁殖期的东北林蛙输卵管相比,腺细胞在冬眠前期显着增大,而上皮细胞形态未发生显着改变。（2）在基因表达水平方面,无参转录组结果表明,在冬眠前期东北林蛙输卵管翻译过程以及类固醇激素合成途径显着高表达。Real Time PCR实验表明,在冬眠前期的输卵管中,HMGCR和LDLR的表达水平显着高于繁殖期,而St AR、P450scc和SF-1表达水平没有显示出显着性变化。（3）在代谢物水平方面,胆固醇测定结果表明,冬眠前期东北林蛙输卵管中游离胆固醇的含量为11.25±1.8μmol/g,显着低于繁殖期输卵管中游离胆固醇的含量（28.78±2.5μmol/g）。激素测定结果表明,冬眠前期东北林蛙输卵管中孕激素的浓度为0.782±0.044 ng/m L,显着低于繁殖期输卵管中孕激素的浓度（1.32±0.21 ng/m L）。（4）在蛋白表达水平方面,免疫组化的实验结果表明,两个时期的东北林蛙输卵管中均能够表达St AR、P450scc、SF-1、HMGCR和LDLR。免疫印迹实验结果表明,在冬眠前期,促进性类固醇激素合成的St AR和P450scc以及HMGCR、LDLR林蛙输卵管中的表达水平显着高于繁殖期,而调控性类固醇激素表达的转录因子SF-1的表达水平没有显示出显着差异。本项研究结果提示冬眠前期林蛙输卵管—林蛙油具有快速利用胆固醇合成孕激素的能力。该研究结果对特定人群如更年期和绝经期女性健康具有重要意义,为可持续开发和利用林蛙油功能性食品提供科学依据。
马超[6]（2020）在《哈蟆油对抑郁模型小鼠作用机制的研究》文中研究表明目的:通过慢性不可预知温和应激法复制小鼠抑郁模型,检测相关行为学指标的变化,应用酶联免疫法、流式细胞术、HE染色、免疫印迹法对脑和血清中生化指标含量,海马组织形态学变化及其中相关蛋白的表达量进行评价,探究哈蟆油的抗抑郁作用并尝试探索其发挥抗抑郁作用的机制。方法:1.60只健康雄性ICR小鼠,平均分为空白组、模型组、氟西汀阳性组、哈蟆油高、中、低剂量组。除空白对照组外,其余各组小鼠均接受28天慢性温和不可预知应激。模型评价后开始灌胃给药,给药14天,按照氟西汀3mg/kg,哈蟆油高800 mg/kg、哈蟆油中剂量400 mg/kg、哈蟆油低剂量200 mg/kg剂量给药,给药期间继续造模。2.指标的检测:（1）给药结束后,对各组小鼠进行行为学测试（2）ELISA法测脑组织中5-HT、NE、DA,血清中CRH、ACTH、CORT的含量。（3）取各组小鼠海马组织,剪碎研磨,制成细胞悬液,过300目尼龙网滤过,流式细胞术检测海马细胞凋亡情况。（4）取海马组织,通过HE染色,检测哈蟆油对抑郁小鼠海马结构的影响。（5）剩余海马组织,-80℃保存,免疫印迹法检测海马组织中GR、MR、BDNF、TrkB、CREB蛋白的表达情况。结果:1.行为学测试结果:与空白对照组相比,模型对照组出现体重减轻;糖水消耗程度降低;悬尾实验、强迫游泳实验静止时间延长;旷场实验运动时间、运动距离、中心停留时间减少,角落停留时间增加（P<0.05）。与模型对照组相比,氟西汀阳性组以及哈蟆油给药组的体重出现明显增加;糖水消耗量升高;悬尾实验、强迫游泳实验静止时间缩短;旷场实验运动时间、运动路程、中心停留时间增加,角落停留时间减少（P<0.05）。2.ELISA检测血清相关指标含量:与空白对照组相比,模型对照组血清中CRH、ACTH、CORT含量均显着增加（P<0.01）;脑中5-HT、NE、DA含量均显着减少（P<0.01）。与模型对照组相比,氟西汀阳性组、哈蟆油高、中、低剂量组CRH、ACTH、CORT含量均显着下降（P<0.05）;5-HT、NE、DA含量均显着升高（P<0.05）。3.海马细胞凋亡检测:与空白对照组比较,模型对照组海马细胞凋亡比例出现明显升高（P<0.01）。与模型对照组相比,氟西汀阳性组、哈蟆油高、中剂量组海马细胞凋亡比例均显着下降（P<0.01）,哈蟆油低剂量组具有明显下降（P<0.05）。4.海马病理学变化:空白对照组海马细胞密集排列整齐。与空白对照组相比,模型对照组海马细胞明显萎缩,排列紊乱,细胞体积缩小。与模型对照组相比,氟西汀阳性组、哈蟆油高、中、低剂量组均得到不同程度改善。5.免疫印迹检测蛋白表达:与空白对照组相比,模型对照组GR、MR、BDNF、TrkB、CREB蛋白的表达明显降低（P<0.01）;与模型对照组相比,氟西汀阳性组、哈蟆油各给药组GR、MR、BDNF、TrkB、CREB蛋白的表达均显着增加（P<0.01）。结论:1.慢性不可预知温和应激模型是模拟长期接受慢性压力导致的抑郁,同人类抑郁症发病原因相似,哈蟆油可以有效改善由慢性不可预知温和应激引起的行为学改变;2.哈蟆油可以有效增加抑郁模型小鼠血清中单胺神经递质5-HT、NE、DA含量;降低CRH、ACTH、CORT的含量;3.哈蟆油能够抑制海马组织细胞的凋亡,减轻海马组织的损伤,改善海马组织病理变化;4.哈蟆油可增加GR、MR蛋白的表达,通过负反馈调节抑制亢进的HPA轴,同时能够提高BDNF、TrkB、CREB蛋白的表达量,通过这种方式,发挥脑源性神经营养因子的神经元保护作用。
逯通,周博宇,孟令仪,张晶莹,孙兰,高峰[7]（2019）在《人参、林蛙油的营养功效研究进展》文中指出人参是五加科植物人参的干燥根和根茎,是分布于东北三省以及河北北部深山密林中的一种名贵药材。随着针对人参化学成分研究的不断深入,人参单体皂苷已被提取50余种,每种单体皂苷的功效千差万别,能够抵御多种疾病和病毒侵害。另外人参中还含有其他成分,例如多肽、氨基酸、植物甾醇、多糖、有机酸、挥发油等均具有不同的营养功效,起到增强人体免疫力的作用[1]。中国林蛙（Rana temporaria chensinensis）是一种广泛分布于中国东北的两栖
李晓华[8]（2019）在《哈蟆油蛋白酶解物对骨质疏松大鼠的保护作用和机制研究》文中进行了进一步梳理目的:探讨哈蟆油蛋白酶解物（Oviductus Ranae protein hydrolysate,ORPH）对骨质疏松模型大鼠保护作用,建立骨质疏松大鼠定量蛋白组学,并进行生物信息学分析,阐述ORPH抗骨质疏松的作用机制。方法:采用碱性蛋白酶酶解法制备ORPH,并利用紫外光谱、红外光谱、蛋白特征显色、SDS-PAGE电泳、氨基酸色谱等方法鉴定ORPH的相关理化性质。利用H2O2损伤MC3T3-E1细胞,MTT法筛选ORPH最佳给药浓度和时间。利用去势法复制骨质疏松大鼠模型,用X-光射线法测定大鼠骨密度（Bone mineral density,BMD）,用改良Trizol法制备总RNA,qPCR法检测骨代谢相关基因mRNA表达水平,Western-blotting法检测骨代谢相关蛋白表达水平,HE染色法观察股骨骨小梁结构变化,免疫组化法评价碱性磷酸酯酶（Alkaline phosphatase,ALP）、骨形态发生蛋白-2（Bone morphogenetic protein2,BMP2）的蛋白表达水平。TMT标记法标记胰蛋白酶水解后肽段,超高效液相法将标记肽段分级,LC-MS联用分析检测肽段母离子及其二级碎片,用生物信息学法进行蛋白注释、结构域注释、KEGG通路注释及亚细胞定位,并进行蛋白功能富集和聚类分析。结果:1.通过评价酶解时间和哈蟆油黏度值变化确定了ORPH制备的最佳水解酶为碱性蛋白酶。通过SDS-PAGE比较缓冲液提取法和碱性蛋白酶酶解法制备的ORPH分子量分布,哈蟆油酶解后的ORPH分子量明显减小,更容易被机体吸收利用。酶解后得到的ORPH分子量主要集中在30kD及以下,蛋白含量约为60%。极大改善了哈蟆油的水溶性,并消除了哈蟆油的腥臭异味。2.开展了ORPH相关理化性质鉴定。ORPH的最大紫外吸收波长为280-290nm。IR特征吸收官能团为“-COOH”和“-CONH”。ORPH含有17种氨基酸,其中含量最高的为苏氨酸（Thr）,含量为4.87%,氨基酸种类水解前后无变化。双缩脲反应和茚三酮反应,ORPH均显阳性结果。3.用H2O2致成骨细胞MC3T3-E1损伤,建立了氧化损伤模型。给予ORPH干预治疗,MTT法筛选最佳给药时间和给药浓度为400ug/mL和24h。在显微镜下观察可见,空白对照组细胞呈梭形,模型对照组细胞数量减少,与模型对照组比较,ORPH给药组细胞数量增多,细胞的皱缩现象有所改善,其中400ug/mL给药组胞体皱缩现象明显改善。4.评价了ORPH对H2O2损伤MC3T3-E1细胞骨代谢相关maker的调控。ORPH给药组ALP与BMP2 mRNA相对表达量均显着性上调（P<0.01）,Osteocalcin和Runx-2 mRNA相对表达量呈现上调趋势。ORPH给药组ALP、Runx-2和Osteocalcin的蛋白表达明显增加（P<0.01,P<0.05）,BMP2蛋白呈现上调表达趋势,ORPH能够促进成骨细胞增殖和分化,对H2O2损伤MC3T3-E1细胞有一定的保护作用。5.建立了骨质疏松大鼠模型。与空白组比较,模型组大鼠BMD显着降低（P<0.01）,模型建立成功;与模型组比较,给予ORPH治疗90d后,大鼠股骨和腰椎的BMD显着升高（P<0.01,P<0.05）。同时,ORPH能显着改善股骨的BMD和最大载荷量,增强股骨韧性,降低骨折风险。但ORPH对骨质疏松大鼠的体重变化作用不明显。6.开展了大鼠相关脏器组织和股骨病理学检测。对去势成年大鼠送检脏器进行组织病理学检查,仅个别系统组织器官出现了轻微炎症,ORPH组未见明显毒性改变。HE染色显示,ORPH能保护股骨骨小梁结构,促进骨小梁排列有序,结构完整,显着降低骨折风险。7.考察了ORPH对骨质疏松大鼠骨代谢相关maker的调节作用。qPCR实验和Western-blot实验证实,ORPH能够上调ALP,Osteocalcin,Runx-2,BMP2基因mRNA和蛋白的相对表达;同时ORPH对破骨细胞相关蛋白TRAP的表达有一定的抑制作用,ORPH对骨代谢平衡有重要调节作用。8.免疫组化实验表明ORPH能明显促进骨质疏松大鼠体内的ALP和BMP2的分泌与表达,从而影响骨骼分化及生长,参与骨代谢过程。9.共鉴定到5654个蛋白质,其中4889个蛋白质具有定量信息注释。以差异倍数值变化超过1.2倍作为显着上调、小于1/1.2作为显着下调的变化标准,与空白组比较,上调表达蛋白有195个,下调表达有204个;与模型组比较,给予ORPH干预后,上调表达蛋白有230个,下调表达蛋白有299个。10.使用KEGG通路数据库对蛋白通路进行注释,使用KEGG在线服务工具KAAS对提交的蛋白进行注释,通过KEGG mapper将注释过的蛋白匹配入数据库中相应的通路中。将模型组与空白组数据进行差异表达蛋白富集分析,富集到KEGG Pathway共11条（P<0.05）。其中富集程度最高的3条Pathway分别Ribosome信号通路,Focal adhession信号通路和ECM-recepertor interaction信号通路。将ORPH给药组与模型组数据进行差异表达蛋白富集分析,富集到KEGG Pathway共14条。其中富集程度最高的2条Pathway分别Ribosome信号通路和Complement and coagulation cascades信号通路。11.以差异倍数值变化超过2倍作为显着上调、小于1/2作为显着下调的变化标准,共筛选出差异蛋白33个。其中,Osteoporosis VS Control组,上调表达蛋白6个,下调表达蛋白16个;ORPHDrug VS Osteoporosis组,上调表达蛋白7个,下调表达蛋白4个。统计表明去势手术引起的差异表达蛋白与ORPH干预治疗引起的差异表达蛋白,存在7个共有差异蛋白,分别是半乳糖凝集素（Galectin,Gal）,丝氨酸蛋白酶抑制剂（Serine protease inhibitor A3K,SerpinA3k）,免疫球蛋白样结构域（Immunoglobulin-like domain,Ighm）,肌球蛋白轻链3（Myosin light chain 3,Myl3）,肌钙蛋白I（Troponin I,Tnni1）,心肌肌钙蛋白C（Cardiac troponin C,TnnC1）、一种免疫球蛋白样结构域（Ig kappa chain C region,IgkC）。给予ORPH治疗后,Gal,Myl3,SerpinA3k等7个差异蛋白表达水平均恢复到正常水平（P<0.01）。结论:本研究成功建立了骨质疏松大鼠模型,证实ORPH能提高大鼠BMD、最大载荷量、促进成骨细胞分化、调节相关骨蛋白表达,参与骨代谢调节。ORPH保护骨质疏松大鼠的作用机制可能是通过调控Gal,Myl3,SerpinA3k等7个关键蛋白,激活相应信号通路,保护成骨细胞分化,促进成骨细胞生长,促进新陈代谢和骨骼再生长,阻止抗氧化剂应激损伤,维持大鼠体内骨代谢平衡,从而发挥抗骨质疏松作用。
孙敬蒙[9]（2019）在《哈蟆油多不饱和脂肪酸累积途径及固体分散体制剂的制备工艺研究》文中认为目的:采集不同地点和不同时期的中国林蛙,确定中国林蛙哈蟆油中多不饱和脂肪酸的组成及含量变化规律;对哈蟆油进行转录组测序,得到哈蟆油多不饱和脂肪酸合成途径,并找到关键酶基因;对哈蟆油进行实时荧光定量测定,探讨哈蟆油不同时期的表达量,从而获得高质量的哈蟆油;进一步将获得的高质量哈蟆油采用固体分散体技术制备成剂型,并建立制剂质量标准,对制剂的稳定性和急性毒性进行研究,并进行剂型的免疫实验验证。方法:采集不同地点和不同时期的中国林蛙样品,取中国林蛙的输卵管,-80.0℃冰箱备存,提取哈蟆油中多不饱和脂肪酸并甲酯化,采用气相色谱法测定其多不饱和脂肪酸的含量,采用美国StatView软件分析多不饱和脂肪酸的组成及相对含量;并分析多不饱和脂肪酸的变化规律,探究哈蟆油质量最好的区域和最佳的采集时期。为了确定哈蟆油多不饱和脂肪酸累积途径,对哈蟆油进行转录组测序,生成数据库,并进行分析和统计,获得哈蟆油多不饱和脂肪酸合成途径及影响哈蟆油中多不饱和脂肪酸的关键酶基因。采用Trizol法提取哈蟆油中的RNA,使用Nanodrop 2000超微量紫外/可见光分光光度计对RNA浓度和质量进行检测,采用1.0%琼脂糖凝胶电泳检测总RNA的完整性;采用Takara公司的试剂盒将哈蟆油中的总RNA反转录为cDNA。采用实时荧光定量PCR检测脂肪酸脱氢酶基因在哈蟆油不同时期中的表达量,与测定各时期哈蟆油中多不饱和脂肪酸的含量相比较,获得高质量的哈蟆油,进一步将获得的高质量哈蟆油采用固体分散体技术制备成剂型,并建立最佳剂型的质量标准,进行稳定性、急性毒性研究,并采用小鼠动物实验进行哈蟆油最佳制剂的免疫实验验证。结果:采用气相色谱法测定中国林蛙不同地点和不同时期中哈蟆油多不饱和脂肪酸含量,结果发现中国吉林省靖宇县三道湖镇浆源中国林蛙养殖厂基地的哈蟆油中多不饱和脂肪酸含量最高,并且发现哈蟆油中的多不饱和脂肪酸含量在散居冬眠期（1112月）时达到最高。通过对哈蟆油转录组测序结果分析,找到哈蟆油多不饱和脂肪酸的合成途径及影响哈蟆油中多不饱和脂肪酸含量的脂肪酸脱氢酶基因。采用实时荧光定量PCR测定哈蟆油不同时期的表达量,发现在散居冬眠期（1112月）时表达量最高。采用固体分散体技术将获得的高质量哈蟆油制备成滴丸剂,基质为聚乙二醇4000,药物与聚乙二醇4000的比例为1:3,冷凝液为甲基硅油（100mm2/s）:轻质液状石蜡（1:1）,药物与基质熔融温度为70℃。建立哈蟆油滴丸质量标准,符合2015版《中国药典》标准,稳定性试验符合要求。证明哈蟆油滴丸属实际无毒级。经口给予小鼠不同剂量的哈蟆油滴丸30天,能增强小鼠迟发型变态反应,说明哈蟆油滴丸能增强细胞免疫功能;并且试验结果表明能提高小鼠单核–巨噬细胞的碳廓清能力,说明哈蟆油滴丸能增强单核-巨噬细胞功能。结论:哈蟆油中的多不饱和脂肪酸含量在中国林蛙散居冬眠期（1112月）时最高,与实时荧光定量PCR测定哈蟆油不同时期的表达量结果相符,并确定哈蟆油多不饱和脂肪酸生物合成的途径,找到关键酶基因;将获得的高质量哈蟆油采用固体分散体技术制备成滴丸剂,质量标准符合2015版《中国药典》规定,免疫试验证明哈蟆油滴丸能提高免疫力。
杜楠,王璐,白鸽,张明星,肖娅萍,张坤,王攀,王筱冰,刘全宏[10]（2018）在《绞股蓝籽油食品安全毒理学评价及抗衰老研究》文中提出【目的】对绞股蓝籽油（GPSO）进行毒理学分析与评价,为绞股蓝籽油的生物学功能研究及其新资源的开发提供科学依据。【方法】通过小鼠急性经口毒性试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验,对GPSO进行食品安全毒理学评估。在小鼠急性经口毒性试验中,于小鼠禁食16h后,各试验组分别经口一次性灌胃0,4.6,10.0及21.5g/kg GPSO,连续观察14d,记录小鼠的饮食、运动、排泄、中毒表现及死亡情况;在小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验中,试验组小鼠以2.5,5.0,10.0g/kg的剂量分别灌胃GPSO,空白对照组以环磷酰胺为阳性药物腹腔注射给药,每天1次,持续5d,处死后取骨髓制作骨髓细胞涂片,镜下观察并计算微核率;在小鼠精子畸形试验中,以性成熟雄性小鼠为试验动物,其中试验组小鼠以2.5,5.0,10.0g/kg的剂量分别灌胃GPSO,空白对照组以环磷酰胺为阳性药物腹腔注射给药,每天1次,持续5d,在最后1次灌胃7,14,21,28和35d后分别处死小鼠,取附睾制作精子涂片,镜检并计算精子畸形率。通过注射D-半乳糖建立衰老模型,同时以绞股蓝籽油作为抗衰老试验药物,按2.0,3.0,4.0mL/kg的剂量进行灌胃给药,60d后检测小鼠体质量、各脏器指数及血清中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）浓度,以及小鼠肝脏、脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性、总抗氧化能力（T-AOC）、过氧化氢酶（CAT）活性及丙二醛（MDA）含量,并观察小鼠肝脏组织的病理变化。【结果】绞股蓝籽油对雌雄小鼠急性经口半数致死剂量LD50值大于10.0g/kg,依据急性毒性剂量分级标准属于实际无毒物质;小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验表明,绞股蓝籽油3个剂量组中雌雄小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率为2.0‰3.8‰,与空白对照组相比无显着差异（P>0.05）,证明绞股蓝籽油不会对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核数造成显着影响;小鼠精子畸形试验表明,绞股蓝籽油低、中、高剂量组与空白对照组之间无显着差异（P>0.05）,表明绞股蓝籽油对小鼠精子无致畸变作用。抗衰老试验表明,与空白对照组相比,衰老模型组小鼠TC、TG、LDL浓度均显着升高（P<0.05）,HDL浓度显着降低（P<0.05）,肝、脑组织中SOD活性和T-AOC能力降低（P<0.05）,MDA含量升高（P<0.05）,证实衰老小鼠建模成功;绞股蓝籽油低、中、高剂量组均可缓解因注射D-半乳糖导致的小鼠饮食量下降、毛皮光泽度变差、行动缓慢、体质量增加缓慢甚至下降等症状;与衰老模型组相比,绞股蓝籽油可以显着降低小鼠血清中的TC、TG、LDL浓度（P<0.05）,显着提高血清中的HDL浓度（P<0.05）;小鼠肝、脑组织生化指标测定发现,与衰老模型组相比,GPSO中、低剂量组能极显着增强SOD活性（P<0.05）,显着或极显着降低MDA含量（P<0.05）,极显着提高T-AOC能力（P<0.05）,表明绞股蓝籽油可能通过增强机体的总抗氧化能力从而有效清除多余的自由基,降低机体细胞损伤程度,间接保护正常细胞,从而起到抗衰老作用。【结论】初步判定绞股蓝籽油无明显毒副作用,且有一定的抗衰老活性。
二、林蛙油对衰老模型小鼠部分生理指标的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、林蛙油对衰老模型小鼠部分生理指标的影响（论文提纲范文）
（1）哈蟆油蛋白质组学分析及多肽的制备工艺与生物活性的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 1 哈蟆油研究进展 |
| 2 哈蟆油多肽的研究进展 |
| 3 酒精性肝病的研究现状 |
| 实验研究 |
| 第一章 黑龙江与东北哈蟆油的蛋白质组学差异分析 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 黑龙江林蛙和东北林蛙的形态比较 |
| 2.2 蛋白提取 |
| 2.3 胰酶酶解 |
| 2.4 TMT肽段标记 |
| 2.5 液相色谱-质谱联用分析 |
| 2.6 数据库搜索 |
| 2.7 生物信息学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 黑龙江林蛙和东北林蛙的形态比较 |
| 3.2 质谱质控 |
| 3.3 蛋白鉴定总览 |
| 3.4 亚细胞结构定位分类 |
| 3.5 差异蛋白功能分析 |
| 3.6 蛋白互作网络 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 哈蟆油提取工艺的优化及多肽的制备 |
| 1 哈蟆油的提取工艺及优化 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 哈蟆油预处理 |
| 1.2.2 哈蟆油蛋白质含量的测定 |
| 1.2.3 单因素考察 |
| 1.2.4 响应面优化哈蟆油的最佳提取条件 |
| 1.3 结果与讨论 |
| 1.3.1 蛋白质标曲结果 |
| 1.3.2 单因素实验结果及分析 |
| 1.3.3 响应面实验结果及分析 |
| 2 哈蟆油多肽的提取制备 |
| 2.1 材料与仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 蛋白酶的选择 |
| 2.2.2 ORPH的制备 |
| 2.2.3 考马斯亮蓝法测定ORPH蛋白含量 |
| 2.2.4 SDS-PAGE电泳检测ORPH的蛋白分布 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 ORPH的蛋白浓度测定结果 |
| 2.3.2 SDS-PAGE电泳 |
| 3 小结 |
| 第三章 哈蟆油多肽生物活性作用效应评价 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 实验试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 酶解前后哈蟆油抗氧化活性的研究 |
| 2.2 ORPH对不同细胞系的作用 |
| 2.3 检测ORPH对乙醇诱导损伤L-02 细胞活力的变化 |
| 2.4 检测细胞周期的变化 |
| 2.5 定性检测细胞凋亡的变化 |
| 2.6 定量检测细胞凋亡的变化 |
| 2.7 线粒体功能检测 |
| 2.8 Western blot实验 |
| 2.9 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 酶解前后哈蟆油的抗氧化活性 |
| 3.2 CCK-8 法筛选细胞系 |
| 3.3 ORPH对乙醇诱导的L-02 细胞存活率的影响 |
| 3.4 ORPH对L-02 细胞周期的影响 |
| 3.5 ORPH对L-02 细胞凋亡的影响(定性) |
| 3.6 ORPH对L-02细胞凋亡的影响（定量） |
| 3.7 ORPH对乙醇诱导L-02 细胞MMP水平的影响 |
| 3.8 ORPH对乙醇诱导L-02 细胞内ROS生成量的影响 |
| 3.9 WB实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（2）食品胶对林蛙油凝胶特性的影响及其产品创制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 林蛙油营养成分研究概况 |
| 1.1.1 蛋白质及氨基酸 |
| 1.1.2 脂肪酸和磷脂 |
| 1.1.3 类固醇 |
| 1.1.4 维生素和矿质元素 |
| 1.1.5 多糖 |
| 1.2 林蛙油生理功能研究进展 |
| 1.2.1 抗氧化及抗衰老作用 |
| 1.2.2 抗疲劳作用 |
| 1.2.3 增强免疫力作用 |
| 1.2.4 调节血脂 |
| 1.2.5 促性成熟 |
| 1.2.6 镇咳抗炎 |
| 1.2.7 其他生理功能 |
| 1.3 林蛙油产品开发现状 |
| 1.4 食品胶及其应用 |
| 1.4.1 黄原胶 |
| 1.4.2 魔芋胶 |
| 1.4.3 黄原胶-魔芋胶复配体系 |
| 1.5 多糖-蛋白质相互作用研究进展 |
| 1.5.1 多糖-蛋白质的相互作用力 |
| 1.5.2 多糖-蛋白质相互作用对复合体系凝胶性能的影响 |
| 1.5.3 林蛙油凝胶研究进展 |
| 1.6 本文研究意义及内容 |
| 1.6.1 研究意义 |
| 1.6.2 主要研究内容 |
| 1.6.3 技术路线 |
| 第2章 食品胶对林蛙油凝胶流变特性的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 试验材料与仪器 |
| 2.2.1 试验原料 |
| 2.2.2 试验试剂 |
| 2.2.3 试验仪器 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 食品胶-林蛙油复合凝胶体系制备 |
| 2.3.2 食品胶-林蛙油复合凝胶体系流变学特性的测定 |
| 2.4 试验结果 |
| 2.4.1 食品胶对林蛙油凝胶表观黏度的影响 |
| 2.4.2 食品胶-林蛙油复合凝胶体系线性黏弹区的测定 |
| 2.4.3 食品胶对林蛙油凝胶模量随温度变化的影响 |
| 2.4.4 食品胶对林蛙油凝胶模量随频率变化的影响 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 食品胶对林蛙油凝胶质构特性的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 试验材料与仪器 |
| 3.2.1 试验原料 |
| 3.2.2 试验试剂 |
| 3.2.3 试验仪器 |
| 3.3 试验方法 |
| 3.3.1 食品胶-林蛙油复合凝胶体系制备 |
| 3.3.2 食品胶-林蛙油复合凝胶体系质构性质的测定 |
| 3.3.3 持水性分析 |
| 3.3.4 微观结构观察 |
| 3.4 试验结果 |
| 3.4.1 食品胶对林蛙油凝胶体系质构的影响 |
| 3.4.2 食品胶对林蛙油凝胶持水力的影响 |
| 3.4.3 食品胶对林蛙油凝胶微观结构的影响 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 林蛙油凝胶态食品的研发 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 试验材料与仪器 |
| 4.2.1 试验原料 |
| 4.2.2 试验试剂 |
| 4.2.3 试验仪器 |
| 4.3 试验方法 |
| 4.3.1 林蛙油凝胶态食品的制备 |
| 4.3.2 应用模糊数学模型建立感官评价体系 |
| 4.3.3 单因素试验 |
| 4.3.4 正交试验 |
| 4.3.5 林蛙油凝胶态产品质构分析 |
| 4.3.6 感官评价 |
| 4.3.7 产品主要营养成分分析 |
| 4.4 试验结果 |
| 4.4.1 单因素试验结果与分析 |
| 4.4.2 正交试验模糊评判结果 |
| 4.4.3 正交优化试验结果与分析 |
| 4.4.4 林蛙油凝胶态产品营养成分测定结果 |
| 4.5 本章小结 |
| 第5章 结论 |
| 5.1 全文结论 |
| 5.2 展望 |
| 5.3 创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及科研成果 |
| 致谢 |
（3）林蛙油免疫活性肽的制备及体外活性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 林蛙油概述 |
| 1.1.1 林蛙油营养成分 |
| 1.1.2 林蛙油的保健功能 |
| 1.2 生物活性肽的研究与发展 |
| 1.2.1 生物活性肽概述 |
| 1.2.2 免疫活性肽概述 |
| 1.2.3 免疫活性肽分离纯化 |
| 1.2.4 免疫活性肽研究现状 |
| 1.3 研究意义 |
| 1.4 主要研究内容 |
| 1.5 技术路线 |
| 第2章 林蛙油酶解工艺优化 |
| 2.1 材料与设备 |
| 2.1.1 材料与试剂 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 林蛙油一般营养成分的测定 |
| 2.2.2 林蛙油酶解工艺 |
| 2.2.3 氨基氮含量的测定 |
| 2.2.4 蛋白酶的筛选 |
| 2.2.5 林蛙油蛋白酶解单因素实验研究 |
| 2.2.6 林蛙油蛋白酶水解正交试验研究 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 林蛙油一般营养成分 |
| 2.3.2 蛋白酶的筛选 |
| 2.3.3 酶解工艺单因素实验结果 |
| 2.3.4 林蛙油蛋白酶解正交试验结果 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 林蛙油活性肽的分离纯化及结构鉴定 |
| 3.1 材料与设备 |
| 3.1.1 实验动物与细胞株 |
| 3.1.2 材料与试剂 |
| 3.1.3 主要仪器设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 超滤分离 |
| 3.2.2 凝胶色谱分离纯化 |
| 3.2.3 小鼠脾细胞悬液的制备 |
| 3.2.4 RAW264.7 细胞培养 |
| 3.2.5 F1、F2和F3 对细胞增殖的影响 |
| 3.2.6 F1、F2和F3对RAW264.7 细胞吞噬活性的影响 |
| 3.2.7 F2 氨基酸序列测定 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 凝胶色谱分离纯化 |
| 3.3.2 F1、F2和F3 对小鼠脾细胞增殖的影响 |
| 3.3.3 F1、F2和F3对RAW264.7 细胞增殖的影响 |
| 3.3.4 F1、F2和F3对RAW264.7 细胞吞噬活性的影响 |
| 3.3.5 F2 氨基酸序列测定 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 林蛙油免疫活性肽的体外活性研究 |
| 4.1 实验材料与设备 |
| 4.1.1 实验动物与细胞株 |
| 4.1.2 实验材料 |
| 4.1.3 主要仪器设备 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 小鼠脾细胞悬液的制备 |
| 4.2.2 RAW264.7 细胞培养 |
| 4.2.3 F2对CTX抑制的小鼠脾细胞增殖的影响 |
| 4.2.4 F2对CTX抑制的RAW264.7 细胞增殖的影响 |
| 4.2.5 F2对RAW264.7 细胞分泌细胞因子的影响 |
| 4.2.6 F2对RAW264.7 细胞分泌NO的影响 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 F2对CTX抑制的小鼠脾细胞增殖的影响 |
| 4.3.2 F2对CTX抑制的RAW264.7 细胞增殖的影响 |
| 4.3.3 F2对RAW264.7 细胞分泌细胞因子的影响 |
| 4.3.4 F2对RAW264.7 细胞分泌NO的影响 |
| 4.4 本章小结 |
| 第5章 全文结论及展望 |
| 5.1 主要结论 |
| 5.2 主要创新点 |
| 5.3 展望 |
| 参考文献 |
| 导师简介 |
| 作者简介及科研成果 |
| 致谢 |
（4）林蛙油的药理作用研究进展（论文提纲范文）
| 1 抗氧化作用 |
| 2 抗衰老作用 |
| 3 提高机体免疫力的作用 |
| 4 抗疲劳作用 |
| 5 抗(超重)辐射作用 |
| 6 对肝纤维化损伤的修复作用 |
| 7 其他作用 |
（5）东北林蛙油中孕激素及其合成相关因子表达研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 东北林蛙 |
| 1.1.1 东北林蛙 |
| 1.1.2 东北林蛙输卵管 |
| 1.2 东北林蛙油 |
| 1.2.1 林蛙油 |
| 1.2.2 东北林蛙油的生理功能 |
| 1.3 孕激素 |
| 1.3.1 孕激素的功能与价值 |
| 1.3.2 类固醇激素合成急性调节蛋白 |
| 1.3.3 细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶 |
| 1.3.4 类固醇组织特异性核受体 |
| 1.4 胆固醇及其合成和摄取相关蛋白的功能与作用 |
| 1.4.1 胆固醇的功能及作用 |
| 1.4.2 胆固醇在类固醇激素合成中的作用 |
| 1.4.3 羟甲基戊二酰辅酶A还原酶 |
| 1.4.4 低密度脂蛋白受体 |
| 1.5 研究目的与意义及技术路线 |
| 1.5.1 研究目的与意义 |
| 1.5.2 研究技术路线 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 组织学方法 |
| 2.2.1 石蜡切片的制作 |
| 2.2.2 苏木精—伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色 |
| 2.3 无参转录组测序 |
| 2.4 免疫组织化学 |
| 2.5 免疫印迹 |
| 2.6 孕酮含量测定 |
| 2.7 胆固醇含量测定 |
| 2.8 Real Time PCR实验 |
| 2.8.1 引物设计 |
| 2.8.2 总RNA提取 |
| 2.8.3 DNase I处理 |
| 2.8.4 反转录 |
| 2.8.5 Real Time PCR实验 |
| 2.9 数据统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 东北林蛙输卵管组织学观察 |
| 3.2 无参转录组学实验结果 |
| 3.2.1 差异基因富集分析 |
| 3.2.2 翻译相关途径转录组学分析 |
| 3.2.3 类固醇激素合成相关途径转录组分析 |
| 3.3 林蛙油中孕激素和胆固醇含量测定 |
| 3.3.1 林蛙油中孕激素含量测定 |
| 3.3.2 林蛙油中胆固醇含量测定 |
| 3.4 林蛙油中孕激素合成相关因子的免疫定位 |
| 3.4.1 林蛙油中StAR和P450scc的免疫定位 |
| 3.4.2 林蛙油中SF-1的免疫定位 |
| 3.4.3 林蛙油中HMGCR的免疫定位 |
| 3.4.4 林蛙油中LDLR的免疫定位 |
| 3.5 林蛙油中孕激素合成相关因子的免疫定量 |
| 3.5.1 林蛙油中StAR和P450scc的免疫定量 |
| 3.5.2 林蛙油中SF-1的免疫定量 |
| 3.5.3 林蛙油中HMGCR的免疫定量 |
| 3.5.4 林蛙油中LDLR的免疫定量 |
| 3.6 林蛙油中孕激素合成相关因子的分子定量 |
| 3.6.1 林蛙油中StAR和P450scc的分子定量 |
| 3.6.2 林蛙油中SF-1的分子定量 |
| 3.6.3 林蛙油中HMGCR的分子定量 |
| 3.6.4 林蛙油中LDLR的分子定量 |
| 4 讨论 |
| 4.1 林蛙油的组织学观察 |
| 4.2 林蛙油中孕激素及其合成相关因子的表达与作用 |
| 4.2.1 孕激素的表达与作用 |
| 4.2.2 StAR和P450scc的表达与作用 |
| 4.2.3 SF-1的表达与作用 |
| 4.3 林蛙油中胆固醇及其合成和摄取相关基因的表达与作用 |
| 4.3.1 胆固醇的表达与作用 |
| 4.3.2 HMGCR与LDLR的表达与作用 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 导师简介 |
| 获得成果目录 |
| 致谢 |
（6）哈蟆油对抑郁模型小鼠作用机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 第一章 哈蟆油对抑郁模型小鼠行为学的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 哈蟆油的抗抑郁作用机制 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间科研成果 |
| 个人简历 |
（7）人参、林蛙油的营养功效研究进展（论文提纲范文）
| 1 抗氧化及抗衰老作用 |
| 2 抗疲劳作用 |
| 3 抗肿瘤作用 |
| 4 降血脂作用 |
| 5 防治骨质疏松作用 |
| 6 人参其他作用 |
| 7 林蛙油其他作用 |
（8）哈蟆油蛋白酶解物对骨质疏松大鼠的保护作用和机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 实验研究 |
| 第一章 ORPH的制备及其理化性质研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 药品与试剂 |
| 1.2 仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 蛋白水解酶的选择 |
| 2.2 ORPH的制备 |
| 2.3 紫外分光光度法检测ORPH最大紫外吸收 |
| 2.4 考马斯亮蓝法测定ORPH蛋白含量 |
| 2.5 SDS-PAGE电泳检测ORPH的蛋白分布 |
| 2.6 ORPH中主要氨基酸种类及含量测定 |
| 2.7 ORPH的蛋白质显色反应——茚三酮反应 |
| 2.8 ORPH的蛋白质显色反应——双缩脲反应 |
| 2.9 红外光谱法(IR)鉴定ORPH化学结构 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 不同蛋白酶对哈蟆油黏度的影响 |
| 3.2 ORPH的紫外最大吸收波长 |
| 3.3 ORPH的蛋白浓度测定结果 |
| 3.4 SDS-PAGE电泳检测结果 |
| 3.5 ORPH样品中氨基酸种类及含量对比 |
| 3.6 茚三酮显色反应结果 |
| 3.7 双缩脲反应结果 |
| 3.8 ORPH红外蛋白特征吸收结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 ORPH对 H_2O_2 致成骨细胞MC3T3 损伤的保护作用研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 细胞系 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 1.3 仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 MTT法筛选最佳给药浓度及时间 |
| 2.2 Real-time PCR检测ALP、Osteocalcin、BMP2及Runx2 mRNA表达 |
| 2.3 Western-blotting法检测骨代谢相关蛋白表达 |
| 2.3.1 蛋白样品的制备 |
| 2.3.2 Western-blotting实验 |
| 2.4 统计方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 最佳给药浓度、给药时间的筛选 |
| 3.2 ORPH对 H_2O_2 损伤MC3T3-E1 细胞形态的影响 |
| 3.3 ORPH对 H_2O_2 损伤MC3T3-E1 细胞骨代谢相关基因表达水平的影响 |
| 3.4 ORPH对 H_2O_2 损伤MC3T3-E1 细胞骨代谢相关蛋白表达水平的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 ORPH对骨质疏松模型大鼠的保护作用研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 1.3 仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组及给药 |
| 2.2 骨密度(BMD)测定 |
| 2.3 最大载荷(折断)测定 |
| 2.4 qPCR检测ORPH骨代谢相关基因mRNA表达 |
| 2.4.1 引物设计ORPH对骨质疏松大鼠体重的影响 |
| 2.4.2 股骨总RNA提取ORPH对骨质疏松大鼠体重的影响 |
| 2.4.3 琼脂糖电泳检测总RNA |
| 2.4.5 RT实验 |
| 2.5 病理学检测 |
| 2.5.1 大鼠相关脏器病理学研究 |
| 2.5.2 大鼠股骨病理学研究 |
| 2.5.2.1 固定和钙化 |
| 2.5.2.2 石蜡包埋和切片 |
| 2.5.2.3 H.E.对染法(苏木素与伊红对比染色法) |
| 2.6 免疫组织化学法检测股骨ALP和 BMP2 表达 |
| 2.7 Western-blot法检测骨代谢相关蛋白表达 |
| 2.7.1 骨蛋白的提取 |
| 2.7.2 Western-blot实验 |
| 2.8 统计方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 ORPH对骨质疏松大鼠体重的影响 |
| 3.2 ORPH对骨质疏松大鼠主要脏器的影响 |
| 3.3 ORPH对骨质疏松大鼠BMD的影响 |
| 3.4 ORPH对骨质疏松大鼠骨生物力学的影响 |
| 3.5 大鼠股骨总RNA的制备及质量评价 |
| 3.6 反转录c DNA浓度及质量评价 |
| 3.7 ORPH对代谢相关基因mRNA表达的调节 |
| 3.8 ORPH对对骨生长、骨吸收相关蛋白的调节 |
| 3.9 HE染色检测ORPH对骨质疏松大鼠股骨骨形态保护作用 |
| 3.10 免疫组化检测ORPH对 ALP与 BMP2 表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四章 基于TMT蛋白定量技术ORPH保护骨质疏松大鼠的生物信息学分析及其分子机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验样品 |
| 1.2 药品及试剂 |
| 1.3 仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 技术路线 |
| 2.2 股骨总蛋白提取及制备 |
| 2.3 SDS-PAGE电泳检测及蛋白样品质量评价 |
| 2.4 胰酶酶解及肽段标记 |
| 2.5 液相色谱—质谱联用分析 |
| 2.6 数据库搜索 |
| 2.7 生物信息学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 样品质控 |
| 3.1.1 蛋白样品提取及浓度鉴定 |
| 3.1.2 肽段质控检测 |
| 3.2 蛋白鉴定总览 |
| 3.3 差异表达蛋白KEGG Pathway富集分析 |
| 3.3.1 去势手术后差异表达蛋白KEGG Pathway富集分析 |
| 3.3.2 ORPH治疗后差异表达蛋白KEGG Pathway富集分析 |
| 3.4 ORPH防治骨质疏松的分子调控作用 |
| 4 讨论 |
| 4.1 基于TMT技术的定量蛋白组学检测 |
| 4.2 TMT定量蛋白组学数据分析讨论 |
| 4.3 ORPH抗大鼠骨质疏松症分子机制讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间科研成果 |
| 个人简历 |
（9）哈蟆油多不饱和脂肪酸累积途径及固体分散体制剂的制备工艺研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 实验研究 |
| 第一章 哈蟆油多不饱和脂肪酸测定 |
| 1 材料与试剂 |
| 2 试验设备 |
| 3 研究气相色谱条件 |
| 4 哈蟆油多不饱和脂肪酸测定 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 第二章 哈蟆油多不饱和脂肪酸生物合成途径的研究及关键酶基因的筛选 |
| 1 动物 |
| 2 林蛙输卵管样本的转录物组测序分析 |
| 3 小结 |
| 第三章 哈蟆油表达量的测定 |
| 1 材料与试剂 |
| 2 试验设备 |
| 3 试验动物 |
| 4 中国林蛙解剖 |
| 5 哈蟆油RNA的提取 |
| 6 哈蟆油总RNA反转录为cDNA |
| 7 内参基因的选择和引物设计 |
| 8 哈蟆油cDNA实时荧光定量测定 |
| 9 小结 |
| 第四章 基于固体分散体技术制备的成型工艺研究及质量标准的建立 |
| 1 实验材料 |
| 2 试验方法 |
| 3 哈蟆油滴丸的质量标准 |
| 4 小结 |
| 第五章 哈蟆油滴丸免疫实验验证 |
| 1 材料 |
| 2 试验方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 1 哈蟆油多不饱和脂肪酸变化规律 |
| 2 哈蟆油的转录组测序 |
| 3 哈蟆油表达量变化 |
| 4 采用固定分散体技术制备哈蟆油滴丸 |
| 5 哈蟆油滴丸免疫实验验证 |
| 本文创新点 |
| 1 中国林蛙安全度过冬眠期机制 |
| 2 在美国Genbank上传基因序列 |
| 3 从哈蟆油多不饱和脂肪酸的组成及含量控制哈蟆油质量 |
| 4 采用固体分散体技术将哈蟆油制备成滴丸剂 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（10）绞股蓝籽油食品安全毒理学评价及抗衰老研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试剂与仪器 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.3.1 小鼠急性经口毒性试验 |
| 1.3.2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验 |
| 1.3.3 小鼠精子畸形试验 |
| 1.3.4抗衰老研究 |
| 1.3.5 脏器指数 |
| 1.3.6 测试样品的制备 |
| 1.3.7 肝脏组织病理学石蜡切片的制作 |
| 1.3.8 血清及脑、肝组织生理生化指标的检测 |
| 1.4 数据分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 小鼠急性经口毒性试验 |
| 2.2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验 |
| 2.3 精子畸形试验 |
| 2.4 绞股蓝籽油对D-半乳糖致衰老小鼠体质量的影响 |
| 2.5 绞股蓝籽油对D-半乳糖致衰老小鼠脏器指数的影响 |
| 2.6 绞股蓝籽油对D-半乳糖致衰老小鼠血清生化指标的影响 |
| 2.7 绞股蓝籽油对D-半乳糖致衰老小鼠肝脏组织生化指标的影响 |
| 2.8 绞股蓝籽油对D-半乳糖致衰老小鼠脑组织生化指标的影响 |
| 2.9 绞股蓝籽油对D-半乳糖致衰老小鼠肝脏组织病理变化的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
四、林蛙油对衰老模型小鼠部分生理指标的影响（论文参考文献）
- [1]哈蟆油蛋白质组学分析及多肽的制备工艺与生物活性的初步研究[D]. 张怡. 长春中医药大学, 2021(01)
- [2]食品胶对林蛙油凝胶特性的影响及其产品创制[D]. 龙文敏. 吉林大学, 2020(08)
- [3]林蛙油免疫活性肽的制备及体外活性研究[D]. 石红岭. 吉林大学, 2020(08)
- [4]林蛙油的药理作用研究进展[J]. 郭宪一,范红艳. 吉林医药学院学报, 2020(03)
- [5]东北林蛙油中孕激素及其合成相关因子表达研究[D]. 张悦. 北京林业大学, 2020(04)
- [6]哈蟆油对抑郁模型小鼠作用机制的研究[D]. 马超. 长春中医药大学, 2020(09)
- [7]人参、林蛙油的营养功效研究进展[J]. 逯通,周博宇,孟令仪,张晶莹,孙兰,高峰. 中国卫生工程学, 2019(06)
- [8]哈蟆油蛋白酶解物对骨质疏松大鼠的保护作用和机制研究[D]. 李晓华. 长春中医药大学, 2019(03)
- [9]哈蟆油多不饱和脂肪酸累积途径及固体分散体制剂的制备工艺研究[D]. 孙敬蒙. 长春中医药大学, 2019(03)
- [10]绞股蓝籽油食品安全毒理学评价及抗衰老研究[J]. 杜楠,王璐,白鸽,张明星,肖娅萍,张坤,王攀,王筱冰,刘全宏. 西北农林科技大学学报(自然科学版), 2018(05)